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1、TFPI-2在食管鳞癌中的表迖及其临床意义【摘要】目的:探讨TFPI-2在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)SP法测定TFPI-2在食管鳞癌组织、癌旁组织、正常食管组织中的表迗。结果:TFPI-2表达阳性指数在食管鳞癌组织、癌旁组织、正常食管组织中分别为(16.25±9.57)%,(22.41±7.24)%,(27.76±5.30)%。食管鳞癌中淋巴结转移、大小、浸润深度、TNM分期及肿瘤的分化程度与TFPI-2的表达阳性
2、指数则呈负相关(rs分别=-0.315、-0.444、-0.647、-0.772、-0.292)。结论:TFPI-2与食管鳞癌的生长、转移、侵袭有关,是判断食管癌预后的有效指标。【关键词】食管鳞癌;TFPI-2;免疫组织化学【Abstract】Objective:ToexploretheexpressionandclinicalsignificanceofTFPI-2inesophagealsquamouscellcarcinoma.Method:Theexpressionandclinical
3、significanceofTFPI-2innormalesophagealepithelium,adjacenttissuesandesophagealsquamouscellcarcinomabyImmunohistochemistry.Result:ThepositiveindexoftheexpressionofTFPI-2innormalesophagealepithelium,andadjacenttissues,andESCCswererespectively(27.76±5.30
4、)%,(22.41±7.24)%,(16.25±9.57)%.ThepositiveindexoftheexpressionofTFPI-2innormalesophagealepithelium,andadjacenttissues,andESCCsshowedanincreasingtrend,theresultwassignificant(P5cm)的正常食管组织作为正常对照组。1.2方法1.2.1试剂兔抗人VEGFR-3多克隆抗体:购自上海普林斯顿生物科技发展有限公司(1:100)。兔抗
5、人TFPI-2多克隆抗体:购自北京义翘神州生物技术有限公司(1:200)。通用型SP-9000检测试剂盒(549257A):购自北京中杉金桥公司;3,3-二氨基对二氨基联苯(3,3-Diaminobenzidine,DAB)显色试剂盒(549257A):购自北京中杉金桥公司。1.2.2免疫组化染色步骤(SP法)(1)切片烤片后常规二甲苯脱蜡,递减梯度酒精(无水乙醇、95%酒精、80%酒精I、II)各3min脱蜡至水。(2)新鲜配制3%H202,于室温下避光浸泡10min,以阻断内源性过氧化物酶。
6、(3)PBS液洗3次,每次5min。(4)柠檬酸缓冲液浸泡,微波修复(高火加热至沸腾后,降至低火,加热共20min后,自然冷却至室温)。(5)PBS液洗3次,每次2min。(6)滴加通用型的正常山羊血清工作液室温下与湿盒中封闭10mino(7)PBS液洗3次,每次5min。(8)滴加一抗:A兔抗人VEGFR-3多克隆抗体:购自上海普林斯顿生物科技发展有限公司(1:100)。置于湿盒中4°C过夜,B兔抗人TFPI-2多克隆抗体:购自北京义翘神州生物技术有限公司(1:200),置于冰箱中4°C过夜。
7、(9)PBS液洗3次,每次5min。(10)每张切片滴加1滴(约50uL)二抗(1%BSA-PBS),37°C下孵育20min。(11)应用DAB溶液显色,镜下控制染色时间。(12)自来水充分冲洗,苏木素复染。(13)梯度酒精脱水。(14)二甲苯透明、中性树胶封片。1.3统计学处理应用SPSS17.0统计软件包,根据资料类型分别采用字2检验、t检验、方差分析及Spearman等级相关分析进行统计学处理。以P[7]SteinerFA,HongJA,FischetteMR,etal.Sequenti
8、al5-Aza2’-deoxycytidine/depsipeptideFK228treatmentinducestissuefactorpathwayinhibitor2(TFPI-2)expressionincancercells[J].Oncogene,2013,24(13):2386-2397.[8]MiyagiY,KoshikawaN,YasumitsuH,etal.cDNAcloningandmRNAexpressionofaserineproteinaseinhibitorsecr