htra1在食管鳞癌中的作用及其分子调控机制

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniVersityforthedegreeofMaster(doctor)Ef．fectandmolecularregularmechanismofHtrAlindeVelopment0fesophagealsquamousCe¨carcinomaByJinXiaSupervisor：Pro￡Qing—xiaFANOncologytheFirstAf!filiatedHospitalS印2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研

2、究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：勇赢日期：≯一'年lr月甲日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文

3、和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：墨忒日期：沙。，年，，月砷日摘要HtrAl在食管鳞癌发生中的作用及其分子调控机制博士研究生：夏金导师：樊青霞郑州大学一附院肿瘤科郑州450052摘要食管癌是常见的消化道肿瘤之一，全球每年新发约40万例，其中超过25万在中国。特别在河南林县、磁县等太行山地区，食管癌的发病率居世界首位，超到100／100000，是当地恶性肿瘤第一致死原因，成为威胁当地人民群众的主要恶性肿瘤之一。在西方国家，食管腺

4、癌的发病率占食管癌的60％一70％，国内90％以上的食管癌是食管鳞癌(esophagealsqu锄ouscellcarcinoma，ESCC)。食管癌患者总体预后较差，约一半患者就诊时已为晚期，自然病程仅6．8个月，5年生存率10％．25％。可以手术的患者约有90％发生复发转移。分期很早的患者(T1NoMo)，5年生存率可达90％，仍有近一半在5年内复发。肿瘤的局部侵犯及远处转移仍是死亡的主要原因，转移复发的防治是当前食管癌研究的热点和重点。近年来，国内外学者不断的研究探讨食管癌发生，转移和复发的机制，以期提高食管癌患者生存率。HtrAl第一个发现的

5、Ht俄蛋白家族成员，是一种分泌蛋白，通过在关节炎中的上调作用和肿瘤的进展和浸润过程中通过降解细胞外基质显示重要作用。一些研究表明，HtrAl通过下调作用在转化成纤维细胞一些肿瘤的恶性进展中起着重要作用，例如：卵巢癌，黑色素瘤。此外，通过体内和体外实验证明其过表达抑制细胞的生长和增殖，其可能发挥抑制基因的作用。有关食管鳞状细胞癌中HtrAl的表达及其与食管鳞状细胞癌发生与发展，转移浸润等关系的研究，迄今尚未见国内外报道。摘要鉴于上述，本研究首先采用采用原位杂交技术和免疫组织化学技术，检测食管鳞癌组织和相对应的正常食管黏膜组织中H仃A1mRNA和蛋白的表

6、达，分析其表达与临床病理学参数之间的关系；然后利用ImPCR技术扩增人HtrAl基因，将其克隆入pcDNA3．1(+)质粒中，用建立HtrAl真核表达载体pcDNA．HtrAl。在EC9706细胞中表达，获得稳定的高表达HtrAl细胞系，观察H仃A1基因表达上调对EC9706细胞增生物学行为及侵袭能力的影响，研究NF．KB信号途径及下游靶基因的表达水平的变化；最后将上调Ht俄l表达载体pcDNA．HtrAl转染EC9706细胞，经G418筛选后获稳定转染细胞，扩增细胞后通过皮下注射的方式接种于裸鼠体内，进行裸鼠体内致瘤实验，采用免疫组织化学分析不同处

7、理组EC9706裸鼠移植瘤中HtrAl，Ki．67蛋白的表达，Westemblotting方法检测各组裸鼠移植瘤组织中NF．1(B信号途径及下游靶基因的表达水平的变化。总之，本实验以H仃A1为分子靶点，探讨其在食管鳞癌发生发展中的作用，共分为三个部分。第一部分：HtrAl在食管鳞癌组织中的表达及其预后分析方法1．采用原位杂交技术和免疫组织化学技术，检测115例食管鳞癌组织和相对应的正常食管黏膜组织中HtrAlmIⅢA和蛋白的表达，分析其表达与临床病理学参数之间的关系。2．采用半定量ImPCR分析和Wbstemblotting技术随机选取3例食管鳞癌癌

8、组织和相对应的正常食管黏膜组织中Ht以1mRNA和蛋白的表达，利用Kaplan．Meier生存曲线分析Htr