hsa-mir-675-5p在食管鳞癌中的表达及其功能机制研究

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1、万方数据中图分类号B鱼主5：垒UDC610博士学位论文学校代码10533Hsa．miR-675．5p在食管鳞癌中的表达及其功能机制研究Theexpressionandfunctionstudyofhsa-·miR··675··5pinesophagealsquamouscellcarcinoma作者姓名：张航学科专业：临床医学研究方向：外科学(心胸外科)学院(系、所)：指导教师：湘雅医院张春芳教授答辩委员中南大学二O一三年六月万方数据本课题受如下基金资助：1．国家自然科学基金资助项目【30670990)2．国家自然科学基金资助项目(30871189)3．湖南省自

2、然科学基金资助项目(2010FJ3134)万方数据原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：摊日期：且年』月兰日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的

3、全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信。B,N务。日期：互啦年』月兰日万方数据Hsa—miR-675—5p在食管鳞癌中的表达及其功能机制研究摘要：研究背景microRNAs(miR_NAs)是一类非编码的长度大约19--'24个核苷酸的单链小RNA分子，参与靶基因转录后水平的调控。成熟的miRNA可以通过和下游靶基因mRNA的3’UTR以非完全匹配方式相结合，从而干扰和抑制靶基因mRNA的翻译。此外，miRNA还可以通过使靶基因mRNA脱腺苷

4、酸化的作用从而降解靶基因mRNA以此抑制靶基因的表达。miRNA广泛参与细胞的增殖、分化、凋亡、应急反应、免疫反应等多种生命活动过程，作为癌基因或抑癌基因对肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭、转移以及血管生成的调节发挥着重要作用。目前通过miRNA芯片杂交方法许多恶性肿瘤的miRNA表达谱得以建立，其中一些miRNA成为肿瘤治疗的新的靶点并成为临床患者预后的肿瘤标志物。当然，miRNA在食管癌中的研究也越来越多，随着研究的不断深入，大量的miRNA在食管癌中的作用得以明确。近年来研究发现miR．675在人类结肠癌、胰腺癌、浆液性子宫内膜癌和子宫内膜癌肉瘤表达上调，和CO

5、PD患者相比，miR．675在肺癌患者的血液中也呈过表达。最近H19被证实是miR．675的前体，并且H19在人类肝癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、睾丸癌、绒毛膜癌、结肠癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、食管癌等恶性肿瘤中也被发现过表达。鉴于H19在食管癌组织中高表达并且H19是miR-675的前体，我们推测miR-675可能在食管癌的发生和发展过程中同样发挥了重要作用，而此研究国内外尚无报道，于是我们进行了本课题的研究。由于H19可以转录合成成熟的miR-675．5p及miR-675—3p两个片段序列，在本课题研究中我们选用miR．675．5p进行研究。II万方数据目的研究

6、miR-675．5p在食管鳞癌组织中的表达水平及其临床病理意义，同时观察miR-675．5p对食管鳞癌细胞生物学行为以及细胞通路的影响并预测其靶基因。方法1．通过实时荧光定量PCR技术检测H19、miR-675．5p在食管鳞癌组织及细胞系中的表达情况，分析二者的相关性，并重点分析H19、miR-675．5p与食管鳞癌患者临床病理特征的相关性：2．通过慢病毒感染Ecal09和EC9706细胞，上调和下调Ecal09和EC9706细胞中miR-675．5p的表达，观察其对食管鳞癌细胞增殖、周期分布、细胞凋亡、侵袭迁移能力以及裸鼠致瘤等细胞生物学特性的影响；3．采用荧

7、光素酶报告基因实验方法观察miR．675．5p在Ecal09和EC9706细胞中对预测靶基因的作用并进行验证；4。通过实时荧光定量PCR和Western免疫印迹观察靶基因REPS2mRNA及蛋白水平在慢病毒转染LV．miR-675．precursor和LV．miR-675．5p．inhibition后在Ecal09及EC9706细胞系中的表达情况，同时应用Western免疫印迹观察RACl、CDC42蛋白在慢病毒转染LV—miR-675-precursor和LV-miR-675-5p—inhibition后在Ecal09及EC9706细胞系中的表达情况；5．通过

8、实时荧光定量PCR及We