s100a4在食管鳞癌上皮间质转化过程中的作用及其分子机制的研究

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1、学校代码10459学号或申请号密级专业博士学位论文S100A4在食管鳞癌上皮间质转化过程中的作用及其分子机制的研究作者姓名：刘剑导师姓名：樊青霞专业学位名称：临床医学培养院系：第一临床学院完成时间：2015年05月Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMaster（doctor）ResearchofmechanismsbywhichS100A4regulatesthedevelopmentofEMTofesophagealsquamouscellcarcinomaByJianLiuSupervisor

2、:Prof.QingxiaFanDepartmentofOncologytheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay2015原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体B经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：-^

3、^J円期：>丨屮年p•月学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留

4、、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者日期：Jo叫年尽月J日摘要S100A4在食管鳞癌上皮间质转化过程中的作用及其分子机制的研究博士研究生：刘剑导师：樊青霞郑州大学第一附属医院肿瘤科郑州450052摘要食管鳞癌致死率高、预后差、疗效有限。在我国，每年约有20~30

5、万新发病例，约占全球发病的一半以上，尤其是河南林县、磁县等太行山区是我国食管癌高发地区，成为威胁我国人民生命健康的重要恶性肿瘤之一。尽管围手术期及手术期化疗、放疗等综合治疗显著提高了食管鳞癌患者的生存时间，然而，对于晚期患者而言，预后仍然很差，自然病程通常约6~8个月，5年生存率为10%~25%左右。食管鳞癌细胞侵袭、迁移至其他器官，而且食管鳞癌更容易发生经淋巴管及血管的远处转移，这成为了食管鳞癌治疗失败的重要原因。因此，研究食管鳞癌侵袭迁移的发生发展机制是国内外该领域研究的热点内容，而上皮间质转化（EMT）及间质上皮转化（MET）是包括食管鳞癌在内的多种恶性肿瘤侵袭迁移的重要调控机制之一。

6、S100A4为钙离子结合蛋白S100蛋白家族成员，其主要参与细胞骨架及细胞膜间相互作用、钙离子信号传递、细胞生长分化等，可降低细胞间黏附力、重塑细胞外基质，并促进细胞异常增生及血管生成，从而增加肿瘤细胞侵袭迁移能力，故被称为恶性肿瘤转移相关基因。S100A4的表达水平与乳腺癌、结肠癌、肺癌、胃癌、食管癌、前列腺癌等恶性肿瘤复发转移成正相关。然而，有关食I摘要管鳞癌中S100A4促使其侵袭迁移的具体分子机制目前仍然不明。本研究首先采用实时荧光定量PCR技术、免疫组化染色技术、Westernblotting技术等检测食管鳞癌组织及配对癌旁食管黏膜组织中S100A4mRNA和蛋白表达水平，并分析S

7、100A4表达与临床病理学参数之间的相关性；然后利用siRNA技术敲减S100A4在食管鳞癌EC9706细胞中的表达水平，观察S100A4表达下调对EC9706细胞侵袭迁移及增殖能力的影响；进一步研究S100A4表达下调对食管癌EC9706细胞E-cadheirn、vimentin和Snail表达的影响；然后上调Snail在EC9706细胞中的表达水平，检测Snail表达水平增高对EC9706侵袭迁移及增殖能力的影响。总之，本实验以S100A4分子为靶点，探讨其在食管鳞癌侵袭迁移中的作用及其分子机制，共分为3个部分。第一部分：S100A4在食管鳞癌组织中的表达及其预后分析方法1.采用原位免疫

8、杂交技术、免疫组化染色技术检测150例食管鳞癌组织及配对癌旁正常食管黏膜组织中S100A4mRNA和蛋白表达水平，并分析其与临床病理学参数之间的相关性。为进一步验证，采用荧光定量PCR技术、Westernblotting技术检测随机选取10例食管鳞癌癌组织和配对癌旁正常食管黏膜组织中S100A4mRNA及蛋白表达水平。2.利用Kaplan-Meier生存曲线分析S100A4mRNA和蛋白表达水平与食管鳞癌患者