DZNep对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniVersityforthedegreeofMasterEf．fectof3一Deazaneplanocinonpr01if．eration，apoptosisandmigrationofesophagealsquamouscellcarcinomaByI沁iliW，angsuperVisor：Prof．医盈andFangxiaGuanCellBiologyC01legeofLifeScienceMay，2014原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已

2、经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：互汤够搦R期：≯仲年，月落日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学

3、位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：磷葡嗍柳年歹月冶日摘要DZNep对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响硕士研究生王瑞莉导师网关方霞郑州大学生物工程系郑州4500013．deazan印lanocinA(DzNep)是一种组蛋白甲基化酶抑制剂，且已被应用于抗肿瘤、抗寄生虫、抗病毒、抗关节炎以及免疫抑制活性等药理作用【l。3J。据报道，DZN印可使肿瘤中沉默的抑癌基因再活化，从而抑制肿瘤细胞的扩散，为治疗肿瘤提供了一个新型的靶点。另外，研究表明DzNep对于治疗肝癌、乳腺癌、髓母细胞瘤、

4、急性髓系白血病、多形性胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌、心脑血管疾病以及艾滋病等均能起到重要作用【4母】。然而关于DZNep对食管鳞癌的作用报道甚少，因此本论文将对DZNep在食管鳞癌发生发展中的作用进行初步研究。食管鳞癌是我国较常见的消化道恶性肿瘤，其病发率和病死率位居全国恶性肿瘤第四位。一般情况下患者确诊时已为中期或者晚期，且容易复发，预后较差【Io’ll】。传统的食管鳞癌治疗方法主要包括外科手术治疗、化疗以及放疗，然而患者的治愈率以及预后情况并不乐观。由于诱发肿瘤的相关基因的变化是经过多阶段积累而成，因而在食管鳞癌癌变的不同阶段均涉及到多个癌基因的激活以及抑癌基因的

5、失活。因此，寻找治疗食管鳞癌的分子靶向药物，联合其他治疗手段从而综合治疗食管鳞癌已迫在眉睫。S．腺苷高半胱氨酸水解酶(S．adenosylhomocysteinehydrolase，SAHH)作为甲基化通路中的重要限速酶，可催化体内细胞S．腺苷高半胱氨酸(S．adenosylhomocysteine，SAH)水解生成腺苷(adenosine，Ado)和高半胱氨酸(homocysteine，Hcy)，该水解反应是S．腺苷高半胱氨酸代谢的唯一途径，且是一种可逆反应。腺苷在一系列酶的催化下可生成cAMP，后者作为细胞内的第二信使，可参与细胞信号转导【12】。同时，高半胱氨

6、酸通过一系列催化反应，生成s-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethioine，SAM)，SAM为体内转甲基反应提供甲基，在甲基转移酶的催化下生成S．腺苷高半胱氨酸，从而完成整个甲基摘要化循环。可见，SAHH是生物体内转甲基反应的重要调控者，调控多种受体分子，例如蛋白、核酸以及一些信号转导分子等的甲基化反应【13】。EZH2是PRC2家族中的组蛋白甲基转移酶，主要介导肿瘤细胞的组蛋白去甲基化，在多种肿瘤细胞中过表达。EZH2通过催化组蛋白3第27位三甲基化(H3K27me3)修饰而诱导基因沉默[14】，且在调节转录调控和染色质状态方面也起到一定作用。已有证据表明

7、，DZN印具有抗肿瘤活性，部分源于通过降低EzH2基因的表达和催化活性从而导致PRC2受到抑制。本研究拟通过一定浓度的DzN印处理食管鳞癌细胞系Ec9706和Ecal09细胞，并检测DZN印处理后细胞的细胞周期、增殖、迁移、凋以及粘附能力的变化，进而探讨DzNep对食管鳞癌细胞的影响。本研究主要分为两部分，第一部分对DzN印处理食管鳞癌细胞的条件进行探索和优化，第二部分检测DZN印处理食管鳞癌细胞后细胞周期、增殖、迁移、凋亡以及粘附能力的变化。方法1细胞培养食管鳞癌细胞EC9706、Ecal09均为本实验室保存。两株细胞均在含有10％胎牛血清的I冲MI．1640