佛波酯对人肺腺癌a549细胞增殖和侵袭能力影响

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1、中文摘要佛波酯对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响研究生吴晓东1导师郭玉忠1副教授韩J下涛2研究员1郑州大学基础医学院临床药理学教研室2河南省肿瘤医院河南郑州450052摘要12．氧一十四烷酰佛波醇．13．乙酸酯(12．O．tetradecanoylphorb01．13．acetate，TPA)是佛波酯类化合物中活性较高的一种，具有诱导多种肿瘤细胞分化的作用。TPA在诱导肺腺癌细胞分化的同时对细胞功能方面的影响尚未见报道，如粘附能力、迁移运动、侵袭能力等。目的主要观察TPA对人肺腺癌A54

2、9细胞在迁移运动能力、侵袭能力和对顺铂敏感性等方面的影响。方法1细胞培养所用细胞均在环境条件为37"C±O．3。C、相对湿度>／95％、C02浓度5％±0．1％的细胞培养箱内用含10％胎牛血清的RPMll640培养基传代培养。实验所用的细胞为A549细胞、A549／TPA细胞、A549／R．CDDP细胞。A549fFPA细胞：A549细胞用含5ng／mlTPA、10％胎牛血清的RPMll640传代培养，9个月后筛选出的能够在含5ng／mlTPA的培养基中稳定贴壁生长的细胞。然后用含5ng／mlT

3、PA的培养基传代培养，用于实验。AS49／R-CDDP细胞：A549细胞用含不同浓度顺铂、10％胎牛血清的RPMll640培养10个月后，筛选出能够在含299／ml顺铂的培养基中稳定生长的细胞，耐药倍数达10倍以上，可以认为是耐顺铂的A549细胞。然后用含21xg／ml顺铂中文摘要的培养基传代培养，用于实验。2实验方法应用MTTLL色法、人工细胞计数法、平板克隆形成实验观察TPA对细胞增殖特性和细胞形态的影响。用流式细胞仪并结合免疫细胞化学的方法，判断TPA对细胞周期的影响。用MTT}=L色法测

4、定TPA联合顺铂对A549细胞的敏感性。用细胞计数的方法测定细胞对人工基底膜的粘附能力、运动能力，对Transwell侵袭小室的侵袭能力，用流式细胞仪测定趋化因子受体(CXCR4)表达的变化。结果1TPA对细胞增殖特性的影响MTT实验结果表明，A549细胞用TPAlng／ml、5ng／ml处理组的抑制率与对照组相比无统计学差异，TPA10ng／ml处理组与对照组相比有统计学差异。TPA对A549细胞时间依赖关系分析，TPA5ng／ml处理组从第3天开始出现有大量的悬浮细胞，而对照组无此现象；A5

5、49／TPA细胞的TPA5n咖1处理组从第47天Y1：始与对照组存在统计学差异，且失去对数生长的特性，单位面积的细胞密度降低，7天后A549／TPA细胞密度是对照组的27．31％。平板克隆形成实验的结果显示A549细胞用TPAlng／ml、5ng／ml处理组存活分数与对照组相比分别降"fk毛44．20％、72．10％，A549／TPA细胞的TPA5ng／ml籼的存活分数与对照组相比降低52．30％。2TPA对细胞形态学的影响平板克隆形成实验中，A549细胞的TPAlng／ml、5n咖l处理组和A

6、549／TPA细胞组都存在细胞质出现空泡或类似网球拍状的空泡细胞现象，而对照组无此现象。A549细胞的TPAlng／ml、5ng／ml处理组的空泡细胞所占整个克隆集落的比例分别为8．41％、26．38％。3TPA对细胞周期Go期和Gl期的影响胞进入Gl期并把A549细胞阻滞在Gl期，结果显示，TPA促进A549细胞的Go期细A549／TPA细胞的这种结果更显著。4TPA增强细胞对顺铂敏感性A549细胞，单用顺铂时IC50为0．461．tg／ml，联合TPA时顺铂的IC50为0．161xg／ml；

7、A549／TPA细胞，联合TPA时顺铂的IC50为0．08tag／ml。A549／R．CDDP细胞，单用顺铂时IC50为6．981xg／ml，TPA处理三天后联合TPA时顺铂的IC50为3．021xg／ml。实验各组所使用的TPA浓度为5ng／ml，在此浓度下单用TPA的抑制率与各自对照组相比无统计学差异。5TPA对细胞的粘附、运动、侵袭能力和趋化因子受体(CXCR4)表达的影响5．1对人工基底膜粘附能力的影响TPA处理组与对照组相比粘附能力降低II中文摘要’73．911％o5．2对细胞在人工基

8、底膜上运动能力的影响在人工基底膜上培养细胞后，对照组出现相互交织成网状结构的“晶格”形态，细胞链接、缠绕在一起形成的“管道”，而TPA处理组的细胞单个散在分布不能形成“晶格"和“管道”状形态。5．3对侵袭能力的影响TPA处理组与对照组相比侵袭能力降低52．27％。5．4对趋化因子受体(CXCR4)表达的影响TPA处理A549细胞24h后，CXCR4的阳性表达率和荧光强度与对照组相比无统计学差异。TPA处理5d后收集的悬浮细胞组CXCR4的阳性表达率和荧光强度与对照组相比分别降低52．57％、22