livin反义寡核苷酸对肺腺癌a549细胞增殖的影响

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1、Livin反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞增殖的影响作者：宋萍郑金旭管淑红,邵启祥李坚【摘要】目的：探讨Livin基因反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN)对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法：用阳离子脂质体介导LivinASODN转染至A549细胞，反转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Livin基因mRNA的表达;MTT法检测转染细胞的生长抑制情况。结果：转染ASODN后A549细胞的Livin基因mRNA的表达明显减少，Livin基因ASODN显著抑制

2、A549细胞增殖，并呈剂量依赖性，与对照的错义寡核苷酸(missenseoligodeoxynucleotides,MSODN)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：Livin反义寡核苷酸能明显抑制A549细胞Livin基因mRNA的表达，抑制细胞增殖，Livin基因有望成为肺癌基因治疗的新靶点。【关键词】肺癌;反义寡核苷酸;Livin　　[Abstract]Objective:Toexploretheeffectsantisenseoligodeoxynucleotides(ASODN)ofL

3、ivinmRNAontheproliferationofhumanlungadenocarcinomaA549cells.Methods:LivinASODNwastransfectedintoA549cellsmediatedbylipofectamine2000.TheexpressionsofLivinmRNAwasdetectedbyRTPCR.The10proliferationratesofA549cellswereassessedbytheMTTassay.Results:Itwasobse

4、rvedthattheexpressionsofLivinmRNAinASODNgroupweredecreasedinaconcentrationdependentmanner.ThecellgrowthinhibitionwasevidentlyincreasedintheASODNtransfectedcells.ThedifferencewassignificantcomparedwithcellsinLivinmissenseoligodeoxynucleotides(MSODN)(P<0.

5、05).Conclusion:LivinASODNsignificantlydownregulatedtheexpressionofLivinmRNAandincreasedgrowthinhibitioninA549cells.ThereforeLivingenemaybecomeanewmoleculartargetforgenetherapyforlungcancer.　　[Keywords]lungcancer;antisenseoligodeoxynucleotides;Livin　　肺癌是世界上

6、最常见的恶性肿瘤之一，由于肺癌早期无典型特异症状,初诊时大多数患者已属于局部晚期或发生远处转移，全身化疗是此类患者治疗的主要手段，但是肺癌尤其是非小细胞肺癌的化疗效果多不理想，靶向治疗为提高肺癌疗效提供了的一条颇具希望的新途径。Livin是凋亡抑制蛋白家族中的一个重要成员，在多数恶性肿瘤组织中表达增高。本研究旨在通过Livin反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,10ASODN)转染A549细胞，观察对肺腺癌细胞A549增殖的影响，探讨Livin作为肺癌新靶点治疗的可能

7、性。　　1材料与方法　　1.1主要试剂　　DMEM培养基(Gibco公司);小牛血清(甘肃兰州民海生物科技有限公司);噻唑蓝，二甲亚砜(Amresco公司);LipofectamineTM2000，Trizol(Invitrogen公司);ReverAid试剂盒(Mbi公司);ExTaq酶为TaKaRa公司产品;人肺癌细胞A549由江苏大学生命科学院提供。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养A549细胞选用含10%小牛血清的DMEM培养液中，置于37℃，5%CO2的饱和湿度恒温细胞培养箱中培养。　　1.2.

8、2寡核苷酸的设计与合成ASODN及错义寡核苷酸(missenseoligodeoxynucleotides,MSODN)序列参照文献[1]，由上海生工生物工程有限公司合成，并对寡核苷酸进行硫代磷酸化修饰，以提高其血清稳定性。反义序列为5′ACCATCACCGGCTGCCCAGT3′;错义序列为5′GTCAGGATCTTCCCACGGAG3′。10　　1.2.3细胞转染及分组当细胞进入对数生长期后，0.2