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《羟基喜树碱对a549人肺腺癌细胞增殖的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、羟基喜树碱对A549人肺腺癌细胞增殖的影响论文.freelL时,抑制作用明显增强,抑制率达44.17%,药物浓度达到100μg/mL时抑制率达50.28%；随着药物作用时间的延长,抑制更明显,.freelL药物组作用48h抑制率达70.98%。结论羟基喜树碱具有抑制A549人肺腺癌细胞增殖的作用,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性。【关键词】羟基喜树碱；A549人肺腺癌细胞；细胞培养；MT华强)Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofHydroxycamptothecin(HCPT)onproliferationofhuma
2、nlungcancercelllineA549invitro.MethodUsingcellcaltureandMTTassaytoobservetheeffectofHCPTonproliferationofhumanlungcancercelllineA549.ResultLoanlungcancercelllineA549after24h.TheeffectL,andtheinhibitoryrateL.TheinhibitoryeffectofHCPTbecamemoresignificantulationofthetime,andtheinhibit
3、oryrateof100μg/mLconcentrationofHCPTanlungcancercellA549invitro.Theeffectisdoseandtimedependent.Keyptothecin；humanlungcancercelllineA549；cellcalture；MTTassay羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)是天然生物碱,来源于我国特有且资源丰富的珙桐植物——喜树。TT分析法观察HCPT对A549人肺腺癌细胞增殖的抑制作用,从体外实验验证临床效果,为今后进一步探讨HCPT的其它抗癌机制奠定基础。
4、1实验材料1.1药物和试剂羟基喜树碱注射液(湖北黄石飞云制药有限公司,批号041201)。小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；RPMI-1640干粉(美国Gibco公司)；MTT及胰酶(华美生物工程公司)；二甲基亚砜(DMSO,美国Sigma公司)。1.2细胞株A549人肺腺癌细胞株,中国医科大学细胞生物教研室提供。1.3主要仪器CO2恒温细胞培养箱(德国),超净工作台(日本Sanyo公司产品),倒置相差显微镜(日本),酶标仪(台湾)。2实验方法2.1药液制备及分组将一定量的羟基喜树碱注射液用适量的RPMI-1640完全培养液分别配成几种不同的浓度备用
5、,终浓度分别为1、50、100μg/mL。实验设不同浓度用药组、空白对照组。2.2细胞培养将冻存于液氮中的安瓿取出,迅速放入37～40℃水浴中,使其在1min内融化,无菌条件下打开安瓿,将细胞悬液吸取到培养瓶中,补足培养液后,置CO2培养箱(5%CO2,37℃)中培养。待细胞贴壁(约6h后),换培养液1次,至细胞长成单层后即可传代,用于实验。2.3细胞增殖的测定采用MTT比色法来检测细胞存活情况。待细胞形成单层,用0.25%胰蛋白酶消化,10%小牛血清RPMI-1640培养液悬浮细胞,将细胞浓度调整为1×105mL,接种至96孔培养板中,每孔0.2mL细胞悬液
6、,继续培养24h后,弃培养液加无血清培养液,48h同步化后,分别加入不同浓度的新鲜含药培养液(1、50、100μg/mL)和无药培养液,每个浓度设8个复孔,培养24h,每孔加入20μLMTT(5mg/mL)液,继续培养4h,弃上清,每孔加入100μLDMSO终止反应,震荡10min使液体混匀,应用酶标仪检测540nm波长处的OD值。2.4药物对细胞增殖抑制时间依赖性的测定细胞经过前述同步化处理后,分别加入不同浓度(1、50、100μg/mL)的含药培养液,培养至8、12、24、48h后,用MTT法检测,方法同“2.3”项。2.5统计学方法实验数值以x±s表示,
7、并采用两样本均数比较的t检验进行统计学处理。3结果3.1培养A549人肺腺癌细胞株的观察首次换液,倒置相差显微镜下可见较多的细胞碎片,换液后视野变得较为清晰。细胞以突起相连接,核较大,胞质较少,核浆比例失调,细胞质透明。3.2不同浓度药物对细胞增殖的抑制以各浓度(1、50、100μg/mL)含药培养液温育A549人肺腺癌细胞株,作用24h后,1μg/mL药物组对细胞株未见明显抑制作用,其余各组均表现出明显抑制作用,100μg/mL药物组最佳,抑制率达50.28%。见表1。表1不同浓度HCPT作用24h对A549人肺腺癌细胞株增殖的抑制作用(略)注：与空白对照组
8、比较,*P0.01。3.3药物对细胞抑
