大豆异黄酮提取纯化工艺及药理作用研究

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1、分类号：0946,83+9密级：gongk公论文编号：2006221槻贵州大学2009届硕士研宂生学位论文大豆异黄酮提取纯化工艺及药理作用研究学科专业：生化与分子生物学研究方向：应用生物化学与生化分离工程导师：郁建平教授研宄生：蔡立中国•贵州•贵阳2009年3月目录1ABSTRACT2第一韋wm41.1大豆异黄酮的研宂现状41.1.1大豆异贲酮概况41.1.2大豆异黄酮的种类和含量分布51.13大豆异黄酮理化性质51.2异黄酮类化合物提取及检测方法61.2.1大豆异黄酮提取方法61.2.2大豆异黄酮纯化方法71.2.3大豆异黄酮检测方法81.3大豆异黄酮药理作川和生理功能8

2、13.1抗癌作用81.3.2对心血管疾病作用91.3.3预防骨质疏松91.3.4抗氣化及淸除自由基101.3.5保护神经1113.6抗菌消炎111.3.7其它功能111.4本课题研究目的与意义111.4本文主要A容121.建立大豆总异黄酮紫外可见分光光度检测方法122.探讨大豆总异黄酮的«佳工艺路线123.大孔树脂纯化大豆异黄酮工艺路线的探究125.大豆异黄酮药理实验13第二章大豆总异黄酮检测方法研宄142.1试剂与仪器:142.1.1測142.1.2试齐IJ142.1.3供试品溶液的配置142.1.4仪器152.2实验与方法152.2.1检测波长的选择152.2.2标准曲

3、线的绘制152.2.3稳定性实验152.2.4精密度实验162.2.5東现性162.3结果与分析162.3.1S大吸收波长确立162.3.2标准曲线172.3.3稳定性实验172.3.4精密度实验172.3.5现性182.4本章小节18第三章大豆总异黄酮提取纯化工艺研宄193.1大豆总异黄酮的提取工艺研宂193.1.1材料与试剂193.1.2实验与方法193.1.3结果与分析213.2大豆总异黄酮的纯化工艺优化253.2.1材料与试剂253.2.2实验与方法253.2.3结果与分析273.3本章小结30第四章大豆异黄酮酸水解工艺条件的研究314.1大豆异黄酮酸水解工艺条件研

4、宂314.1.1材料与仪器314.1.2试验与方法314.1.3结果与分析334.2本章小结36第五章大豆异黄酮药理实验研究375.1大豆异黄酮抗高血脂症作用研究375.1.1材料与仪器375.1.2试验与方法385.1.3结果与讨论405.2大豆异黄酮抗氧化作用研究405.2.1材料与仪器405.2.2试验与方法415.2.3结果与讨论42结论与展望43SCW45主要参考文献46摘要大S祥黄酮(soybeanisoflavones)简称为ISO,为多酿类的混合物。在植物体内以12种形式存在，包括染料木素、大豆苷元和黄豆苷元以及它们的P-葡萄糖苷形式存在，其中糖苷形式占绝大

5、多数。众多学者对其化学成分、药理作用、临床应用做了研宄，但对其黄酮类化合物的研宄尚浅。本文以豆粕为材料对大豆昇黄酮进行了研究，逮立了大S总异黄酮(totalsoybeanisoflavonesT-ISO)含量测定方法，确立了T-ISO的提取、分离、纯化以及酸水解总黄酮苷的工艺路线；并对异黄酮苷元检测方法和T-ISO降血脂以及抗氧化进行了探讨和研究，研究结果如下：1.研究了紫外可见分光光度计对豆粕中大豆总异黄酮的检测法，大豆异黄酮特殊结构在紫外区有吸收峰可以检测提取总黄酮含量。2.T-ISO提取的工艺路线为：提取溶剂为60%乙醇，提取温度为80°C,液料比为20:1,提取时间

6、为2h,提取1次。提取率为0.59%。本实验工艺路线与文献记载工艺路线相比较，具有生产能耗低，工作程序少等优点，更适合于工业生产。3.利用大孔树脂和有机熔剂萃取法对粗提物进行了纯化。以总异黄酮回收率为指标，优化了大豆总异黄酮的纯化工艺路线。纯化工艺为：选用D4006型大孔树脂，1BV(柱床体积)=40mL时，大豆总异黄酮上样液质量浓度为2mg/mL,速率为2mL/min,洗脱剂为80%乙醇，洗脱速率为2mL/min,洗脱剂用量为3BV,通过两次过柱大豆总异黄酮的回收率为56.22%,按此条件纯化后的大豆总异黄酮纯度达30.58%。4.T-ISO酸水解的工艺路线为：甲醇浓度7

7、0%、温度65°C、提取时间3h和盐酸浓度为3mol/L。在此条件下，总黄酮苷元的得率为7.42%。5.T-ISO有一定的降血脂的作用。各剂量组的小鼠血清中的TC、LDL-C、TG与模型组相比，都有一定程度的降低。6.T-ISO对羟自由基的清楚效果比较明显，与抗坏血酸对比，大豆异黄酮精提物和抗坏血酸清除•OH自由基的EC50分别为0.101mg/mL,0.132mg/mL。其清除OH自由的能力明显强于抗坏血酸。关键词：大豆异黄酮提取纯化酸水解降血脂抗氧化Studyontheextraction,purificati