山茶蜂花粉粗多糖的脱蛋白研究

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1、万方数据3蜜蜂杂志(月刊)JOURNALOFBEE(Monthly)NO．32009Mar．山茶蜂花粉粗多糖的脱蛋白研究付中民，刘伟，杨文超，缪晓青(福建农林大学蜂学学院。福建福州350002)摘耍：对山茶蜂花粉粗多糖的脱蛋白方法进行了初步研究。考察了不同体积乙醇沉淀多糖试样的效果和不同体积三氯乙酸沉淀多糖试样中蛋白质的效果，并经SephadexG-75的洗脱。研究结果表明：乙醇体积为多糖液体积的3．5倍时，沉淀效果最好；多糖液中加入等倍体积的10茗三氯乙酸时，脱蛋白效果最佳；多糖经SephadexG

2、一75的洗脱，出现两个洗脱峰。关键词：山茶蜂花粉；多糖；脱蛋白TheResearchontheDeprotelnizatiOnofCamelliaBeePollenCrudePOIysaccharideFUZhong—min。LIUWei，YANGWen—chao，MIAOXiao—qing(BeeSciencesCollege．FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou350002，China)Abstract：Westudiedthemethodso

3、fthedeDrOtelnlza—tionofCamelliabeepollencrudepolysaccharide．Theef-fectsofdeDrOtejnlzatlonondifferentvolumesethanolshowedthat。whenthevolumeratioofethanolandpolysac-charideliquidwas3．5：1。themaximump01ysaccharldewasobtained．Thestudiesoneffectsofdifferentvo

4、lumesl0篇trichloroaceticacid01qdeproteinizationshowedthat，ithadbestdeproteinizationeffectwhenthevolumeratioof10名trichloroaceticacidandpolysaccharideliquidwas1：1．TwopolysaccharidepeakswerefoundthoughSephadexG-75elution．Keywords：Camelliabeepollen；polysacch

5、aride；depro—。teinization中图分类号：$896．4文献标识码：A文章编号：1003-9139(2009)03-0003-03多糖的研究已经得到众多药物研究开发者的重视，蜂花粉多糖也FI益受到火注。在研究蜂花粉多糖提取工艺的基础上，选择一种较好的方法分离纯化多糖很重要。在多糖的分离纯化方法的选择上，应根据被分离的糖类的性质，分析采用何种方法。往往单一的方法，不能取得满意的效果。所以，为充分开发生物活性多糖的药用功能，提高花粉的利用率，有必要进一步探讨其分离纯化条件。1材料与方法1．

6、1材料浓度为5．7m#mL的山茶蜂花粉粗多糖。1．2仪器与试剂收稿日期：2008—07—22基金项目：福建省“6．18”对接项目课题(闽发改推进[20051958号)UV9100紫外一可见分光光度计；RE一52旋转蒸发器；BSE245S电子天平。95％乙醇、磷酸、三氯乙酸、石油醚、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、盐酸、茚三酮、蒽酮、三氯化铁、氢氧化钠、碘化钾、硫酸铜均为国产分析纯；SephadexG一75，购自sigma公司；考马斯亮蓝G-250，困药集团化学试剂有限公司；牛血清白蛋白，国药集团化学试剂有限公司

7、。1．3方法1．3．1蛋白质含量的测定一考马斯亮蓝法川(1)牛血清蛋白的配制。准确称取100mg牛血清白蛋白，溶于100mL蒸馏水中，即为1000斗#mL的原液。(2)考马斯亮蓝G一250的配制。称取100rng考马斯亮蓝G一250，溶于50rnL95％乙醇中，加入85％(w／v)的磷酸100mL。最后用蒸馏水定容到1000mLo此溶液在常温下可放置一个月。(3)标准曲线的制作。取10支干净的带塞试管，分别吸取牛血清蛋白原液0．02、0．04、0．06、0．08、0．10、0．12、0．14、0．16

8、、0．18、0．20mL，各以水补至1．0mL，然后分别加入5．0mL考马斯亮蓝G一250溶液，盖塞，将各试管中溶液纵向倒转混合。水按同样显色操作为空白，放置2rain后用1cm光径的比色杯在595nm波长下比色，记录各管测定的吸光度，并做标准曲线。1．3．2山茶蜂花粉粗多糖乙醇沉淀分离实验取10只烧杯各吸取多糖液10mL，分别加入无水乙醇为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50mL，充分混匀后，静置于4。C冰箱内过夜，离心分离沉淀。上