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1、齿瓣石斛多糖提取及脱蛋白工艺研究作者：赵俊凌，马洁，李戈，段立胜【摘要】目的通过正交实验对齿瓣石斛多糖的提取工艺、脱蛋白条件进行优化研究。方法采用苯酚-硫酸法考察提取温度、提取时间及溶剂体积等因素对多糖提取的影响,采用比色法考察样品与萃取剂体积比、萃取剂体积比、振荡时间等因素对多糖脱蛋白的影响。结果多糖提取的最佳条件，提取温度100℃，提取时间2h，加水量200ml，提取2次，醇沉浓度为80%，醇沉时间30h;多糖脱蛋白的最佳条件，样品/萃取剂(V/V)为4∶1，氯仿/正丁醇(V/V)为4∶1，萃取时间30min。结论苯酚
2、-硫酸法简单，易操作，可测定齿瓣石斛中多糖含量。【关键词】齿瓣石斛;多糖;提取工艺;脱蛋白;正交实验石斛属Dendrobium是兰科中的第二大属，全球共有约一千五百多种，主要分布于亚洲的热带和太平洋岛屿的东亚、东南亚及澳大利亚等地区，我国有76种(74个种，2个变种)10主要分布于华南及西南地区。石斛作为一种名贵中药被《本草纲目》收录，在《神农本草经》中也被列为上品，其有养胃生津、滋阴清热、明目的功能,用于阴伤津亏,口干烦渴,食少干呕,病后虚热,目暗不明等症状。现代药理研究发现石斛属植物具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、抗血小
3、板聚集、扩张血管、降低血糖等多种活性[1]，同时在治疗胃肠道疾病和治疗白内障方面也有很好疗效。 齿瓣石斛DendrobiumdevonianumPaxt为石斛属植物，又名紫皮石斛或紫皮兰，主要分布于我国的云南、广西、贵州等省，缅甸、越南、老挝、泰国也较多，具有“滋阴益胃，生津止渴”之功效。我国及许多其它亚洲国家一直把齿瓣石斛的茎当作生产枫斗的原料,主要用其当年生的幼嫩茎加工生产紫皮枫斗、细黄草，或者替代紧缺的铁皮石斛生产铁皮枫斗，产品销售国内外，深得国内外消费者的青睐，其价格和质量仅次于铁皮石斛。近年来其价格呈上升趋势，
4、鲜品价格已达160元/kg，而紫皮枫斗的价格也达到2000～4000元/kg[2]。 国内外对齿瓣石斛的药理和化学成分的研究都相对较少。李满飞等[3]报道了用比色法测定石斛多糖时测定了齿瓣石斛，其多糖含量为21.09%;熊丽萍等[4]报道了紫皮石斛14.27%,其水体液对超氧阴离子有抗氧化作用;吴刚等[5]报道了云南文山产齿瓣石斛的多糖含量37.05%;黎英等[6]报道了齿瓣石斛的水提物具有清除活性氧的活性;郑志新等[7]报道了齿瓣石斛含有石斛多糖、矿质元素、氨基酸等有效成分。目前以齿瓣石斛(紫皮石斛)为主的产品较单一，
5、具有很大的市场潜力。本实验对齿瓣石斛多糖的提取及纯化工艺进行研究，为齿瓣石斛开发利用提供参考。 1材料与仪器10 1.1材料齿瓣石斛Dendrobiumdevonianum产地为云南省，由中国医学科学院药用植物研究所云南分所王云强助理研究员鉴定。 1.2试剂与仪器苯酚、浓硫酸、石油醚、无水乙醇、氯仿、正丁醇、丙酮、乙醚等均为分析纯。旋转蒸发器R-210(瑞士布奇)，TU-1901新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，数显恒温水浴锅HH-4(常州国华电器有限公司)，GZX-9140恒温数显鼓风干燥箱
6、(上海博讯设备有限公司)，METTLERTOLEDO系列分析天平AB135-S，PL203。 2方法与结果 2.1标准溶液配制[3]精密称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖100.0mg，置100ml容量瓶中，加蒸馏水适量使溶解，稀释至刻度，摇匀。精密吸取10ml置100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，每毫升含葡萄糖0.1mg。 2.2检测波长的选择精密吸取标准葡萄糖溶液0.3ml，置于具塞比色管中，加蒸馏水至2.0ml，再加苯酚试液1.0，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0ml，盖好塞子，迅速摇匀，放置5min，置沸水浴中加
7、热15min，取出，冷水迅速冷却至室温，作为供试溶液。另以2.010ml蒸馏水同样操作，作为空白对照，在400～600nm范围对供试溶液进行扫描。葡萄糖溶液在490nm波长处有最大吸收度,齿瓣石斛多糖溶液在490.50nm波长处有最大吸收度,故选490.50nm作为样品的测量波长。 2.3标准曲线制作精取葡萄糖对照液，0.1，0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7ml，分别加入具塞比色管中，加蒸馏水使成2.0ml，各加苯酚试剂1.0ml，在旋转混匀器上摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0ml，摇匀，放置5min，置沸水浴中
8、加热15min，冷水迅速冷却至室温。另以蒸馏水2.0ml同法操作，作为空白对照，在490nm处测其吸收度。以吸收度值为Y,葡萄糖浓度为X，得回归方程：Y=0.00811+0.01731X，r=0.9995，说明该工作曲线在5.00～35.00μg间的线性良好。 2.4精密度实验精取供试溶液5份，每份0
