抑癌基因pten对人前列腺癌细胞系pc论文

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1、抑癌基因PTEN对人前列腺癌细胞系PC论文杨波，陈宝琦，王禾，邵晨，刘贺亮，秦荣良，袁建林，康福霞.freelorsuppressorgenePTENonhumanprostatecancercelllinePC3.METHODS:CationicliposomeLipofectAmine2000matrixmoreeasily.FCMshoallapoptosispeakandanobviousG1blockincellcycleandEMSshoemalignantfeaturesinultrastructur

2、e.CONCLUSION:PTENcaninhibitPC3groayplayanimportantroleinprostatecancergenetherapy.【Keyor;PTEN;prostaticneoplasms;PC3【摘要】目的：研究抑癌基因PTEN对人前列腺癌细胞系PC3细胞生长、粘附、细胞周期、超微结构的影响.方法：利用阳离子脂质体LipofectAmine2000介导，分别将含PTEN的逆转录病毒载体PBabePTENpuro及空载体PBabepuro转入PC3细胞，观察转染前后细胞的生长、粘

3、附、超微结构、细胞周期改变情况.结果：将PTEN转入后，细胞生长明显受到抑制，生长抑制率为83%；同质型粘附率下降；细胞超微结构失去部分恶性表型特征；细胞周期由G1→S0期受抑制，并且出现一个小的凋亡峰.结论：PTEN可以明显的抑制PC3生长、粘附.因而PTEN可能会在前列腺癌基因治疗上起一定的作用.【关键词】基因，抑制，肿瘤；PTEN；前列腺肿瘤；PC30引言抑癌基因PTEN（phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosome,TEN），又称MMAC1/TEP1，在199

4、7年被发现后，已在肿瘤研究中受到了积极的注意和极为广泛的研究.我们采用已知PTEN缺失的前列腺癌非雄激素依赖型细胞系PC3，利用脂质体转染法将PTEN导入PC3细胞，通过对细胞生长粘附及细胞周期、凋亡，超微结构等改变的观察，为今后进一步研究PTEN对前列腺癌的基因治疗提供依据.1材料和方法1.1材料PTEN载体PBabePTENPuro质粒及空载体PBabePuro质粒美国FrankFurrai博士惠赠，阳离子脂质体LipofectinAmine2000(Gibco)、嘌呤霉素购于Sigma公司，免疫组化、olec

5、ularBiology》制备感受态大肠杆菌株DH5α，质粒DNA转化细菌后，进行扩菌.分别采用碱裂解法，聚乙二醇法及华舜质粒DNA少量抽提系统提取纯化质粒DNA，上述提取获得的质粒DNA用紫外分光光度计测定纯度及浓度，保存备用.1.2.2细胞培养前列腺癌细胞系PC3及DU145由陈宝琦副教授提供，培养基为含100mLL-1FCSRPMI1640培养液.1.2.3阳离子脂质体介导的细胞转染及筛选依照脂质体LipofectinAmine2000说明书操作,选用PuromycinPC34d致死最小剂量05μgmL-1为筛

6、选浓度，维持筛选3～4LL-1FCS的RPMI1640培养恢复4LL-1FCS的RPMI1640培养液恢复细胞约48h，25gL-1胰蛋白酶消化后用于以后的实验.1.2.4转染效果鉴定我们选用免疫组织化学染色方法及AP）激酶信号通路及调节细胞方向性运动的FAK及p130（cas）通路，并可直接使Shc去磷酸化，从而抑制肿瘤细胞的移动与侵袭［7］；PTEN可能通过抑制p27水平下降调节细胞生长周期，p27是G1Cyclin依赖激酶的主要抑制剂，PTEN可诱使细胞由G0/G1期到S期转变停滞［8］.PTEN还抑制Int

7、ergrin介导的MAPK活化，从而抑制上述物质介导的细胞生长分化加强效应［9］.PTEN具特有的脂类磷酯酶活性可诱使细胞停滞于G1期并促进细胞凋亡.而且其作用机制与强力霉素引起的抑制肿瘤细胞生长、粘附、侵袭及转移的机制安全不同［10］.PTEN在前列腺癌细胞系、裸鼠移植模型及组织中有较高频率的突变和缺失.此外，PTEN缺失多发生于进展期前列腺癌，在转移性前列腺癌中的突变率高于原发性前列腺癌，提示PTEN与前列腺癌的病理进展有关［11］，PTEN异常与前列腺癌Gleason积分（≥7分）相关，因此借助PTEN的失表

8、达可以帮助前列腺癌的预后［12］.PTEN可通过抑制VEGFmRNA来影响前列腺癌血管的生成，从而抑制前列腺癌的进展［13］.本实验发现，当PTEN稳定转入PC3细胞后细胞生长受到强烈的抑制，用瞬时转染方法获得的细胞中有较高比例的转入细胞（免疫组化、ilMedUniv),1999;20(10):932-933.［2］YinJA,LiuF,LiuRF.Muta