抑癌基因pten对人前列腺癌细胞系pc

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1、抑癌基因PTEN对人前列腺癌细胞系PC　　【Abstract】AIM：TostudytheeffectsoftumorsuppressorgenePTENonhumanprostatecancercelllinePC3.METHODS:CationicliposomeLipofectAmine2000matrixmoreeasily.FCMshoallapoptosispeakandanobviousG1blockincellcycleandEMSshoemalignantfeaturesinultrastructure.CONCLUSION:PTENcan

2、inhibitPC3groayplayanimportantroleinprostatecancergenetherapy.　　【Keyor;PTEN;prostaticneoplasms;PC3　　【摘要】目的：研究抑癌基因PTEN对人前列腺癌细胞系PC3细胞生长、粘附、细胞周期、超微结构的影响.方法：利用阳离子脂质体LipofectAmine2000介导，分别将含PTEN的逆转录病毒载体PBabePTENpuro及空载体PBabepuro转入PC3细胞，观察转染前后细胞的生长、粘附、超微结构、细胞周期改变情况.结果：将PTEN转入后，细胞生长明显受到抑制

3、，生长抑制率为83%；同质型粘附率下降；细胞超微结构失去部分恶性表型特征；细胞周期由G1→S0期受抑制，并且出现一个小的凋亡峰.结论：PTEN可以明显的抑制PC3生长、粘附.因而PTEN可能会在前列腺癌基因治疗上起一定的作用.　　【关键词】基因，抑制，肿瘤；PTEN；前列腺肿瘤；PC3　　0引言　　抑癌基因PTEN（phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosome,TEN），又称MMAC1/TEP1，在1997年被发现后，已在肿瘤研究中受到了积极的注意和极为广泛的研究.我们采用已知PTEN缺失的前列腺癌非雄激素依赖

4、型细胞系PC3，利用脂质体转染法将PTEN导入PC3细胞，通过对细胞生长粘附及细胞周期、凋亡，超微结构等改变的观察，为今后进一步研究PTEN对前列腺癌的基因治疗提供依据.　　1材料和方法　　1.1材料PTEN载体PBabePTENPuro质粒及空载体PBabePuro质粒美国FrankFurrai博士惠赠，阳离子脂质体LipofectinAmine2000(Gibco)、嘌呤霉素购于Sigma公司，免疫组化、olecularBiology》制备感受态大肠杆菌株DH5α，质粒DNA转化细菌后，进行扩菌.分别采用碱裂解法，聚乙二醇法及华舜质粒DNA少量抽提系统提

5、取纯化质粒DNA，上述提取获得的质粒DNA用紫外分光光度计测定纯度及浓度，保存备用.　　1.2.2细胞培养前列腺癌细胞系PC3及DU145由陈宝琦副教授提供，培养基为含100mL・L-1FCSRPMI1640培养液.　　1.2.3阳离子脂质体介导的细胞转染及筛选依照脂质体LipofectinAmine2000说明书操作,选用PuromycinPC34d致死最小剂量05μg・mL-1为筛选浓度，维持筛选3～4L・L-1FCS的RPMI1640培养恢复4L・L-1FCS的RPMI1640培养液恢复细胞约48

6、h，25g・L-1胰蛋白酶消化后用于以后的实验.　　1.2.4转染效果鉴定我们选用免疫组织化学染色方法及sa染色观察细胞周期改变与凋亡情况；通过透射电子显微镜观察细胞超微结构变化及凋亡情况．　　统计学处理：实验数据采用SPSS统计软件进行统计学处理，数据用x±s表示，统计方法采用方差分析.　　2结果　　2.1转染效果鉴定munohistochemistryresult（略）　　图3Gimsa染色可见转染后出现较多的凋亡细胞（略）　　Fig3TheapoptosisscellsofthetransfectedPC3cellsshosastain（

7、略）　　A：TheparentPC3cellscontainedplentyorganellandhadalotsofirregularmicrovillus,also;B：AfterPTENeapoptosiscellssa染色可见转染后出现较多的凋亡细胞（Fig3）.细胞透射电镜超微结构观察结果显示亲本PC3细胞核质比例较大，细胞器含量丰富，膜表面有数量多而不规则的微绒毛，部分细胞间有桥粒连接及内囊形成等腺癌特征，PTEN转入PC3细胞后细胞核质比例下降，细胞器含量下降，膜表面微绒毛数量少而规则并出现凋亡细胞及凋亡小体.细胞质内出现中等电子密度的颗粒样物

8、质沉积提示PTEN转入后细胞失去部分恶性表型特征并出