抑癌基因pten和乳腺癌转移相关性的研究

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1、学位论文独创性声明本人呈交的学位论文系在导师指导下所取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，沦文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得广东医学院或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。．作者签秽触旦期．2006_05_08学位论文知识产权声明本人在就读研究生期间所完成的学位论文及其相关成果，知识产权归属学校。本人在毕业离校前会将有关的研究资料和结果全部上交导师，离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为广东医学院。学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存

2、、汇编学位论文，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。导师享有发表学位论文、申请成果和专利的权利。注：保密的学位期粼舞、矛叨、旦jk-抑癌基因PTEN与乳腺癌转移相关性研究中文摘要【目的】第10号染色体上缺失的与张力蛋白同源的基因(phosphataseandtensinhomologydeletedchromosome10，PTEN)是继发现P53后又一个与多种肿瘤发生发展密切相关的抑癌基因，而且是发现的第一个具有双重特异磷酸酶活性的抑癌基因，也是最近研究较热的基因之一。许多的文献报道，PTEN基因阻碍细胞G1期向S期过渡，抑制细胞增殖，同时可以从多条信号途径促进细

3、胞凋亡。但由于此基因在结构上与张力蛋白高度同源，且粘着斑激酶(focaladhesionkinase，F觚)是其天然的作用底物，所以有理由推测PTEN基因对细胞的运动迁移能力有着重要的影响。国外学者已经在前列腺癌、膀胱癌的研究中发现PTEN基因可以在～定程度上抑制肿瘤细胞的迁移，但其作用机制尚未明了。本研究旨在探讨PTEN基因对乳腺癌细胞粘附、侵袭能力的影响及其机制，以期PTEN基因能成为乳腺癌转归、预后评价的有用指标，为临床诊断和治疗提供理论依据。【方法】利用脂质体介导法将pBP—wt-PTEN、pBP-G129R-PTEN和pBP—G129E-PTEN质粒分别转染入P

4、TEN基因缺失的乳腺癌细胞株ZR．75．1，用嘌呤霉素成功筛选转入的阳性细胞克隆，并通过PCR和Western．blot方法分别从基因和蛋白质水平检测质粒是否成功转入并获得表达。通过粘附、侵袭实验比较pBP．wt．PTEN、pBP．G129R．PTEN和pBP．G129E质粒成功转染细胞和未经转染细胞之间的粘附、侵袭能力差异。通过Western．blot方法检测各组细胞的总FAK和p397．FAK磷酸化水平，免疫组化方法检测基质金属蛋白酶一2(MMP-2)和E-钙连素(E-CD)的表达情况及RT-PCR检测各组细胞P53mRNA水平分析PTEN基因对FAK磷酸化、MMP．

5、2和E—cadherin表达和P53转录水平的影响，从而明确PTEN与乳腺癌细胞转移间的关系及可能机制。【结果】(1)pBP—wt—PTEN、pBP—G129R—PTEN和pBP—G129E—PTEN三种质粒在DH5O细菌中成功转化，并经限制性酶切反应确定所提取的质粒是我们希望得到的三种质粒。(2)pBP—wt-PTEN、pBP-G129R-PTEN和pBP-G129E—PTEN三种质粒同荧光质粒共同转染ZR．75．1细胞，通过可光下计数细胞总数，荧光显微镜下计数成功转染细胞数，而得到它们的转染率分别为93．％、89％ff：17190．5％。(3)用0．8mg／mL嘌呤霉

6、素从转染细胞中筛选到成功转染细胞，并通过PCReliWestern．blot证明筛选出的细胞是质粒成功转入并获得表达的细胞。(4)pBP-wt-PTEN、pBP—G129R—PTEN和pBP—G129E—PTEN三种质粒转染的细胞粘附抑制率分别为65．7％，8．8％和43．5％。侵袭抑制率分别为70．4％，6．9％和63．5％．(5)Western-blot分析表明pBP—wt—PTEN、pBP—G129R-PTEN和pBP．G129E—PTEN三种质粒转染的细胞总FAK水平差异无显著性，但pBP—wt—PTEN细胞p397_FAK水平比pBP—G129R．PTEN细胞低

7、而与pBP．G129E．PTEN细胞无差异。(6)免疫组化分析表明pBP—wt-PTEN、pBP-G129R-PTEN和pBP—G129E—PTEN三种质粒转染的细胞MMP一2水平彼此问差异具有统计学意义，pBP—wt．PTEN细胞低于pBP—G129E．PTEN细胞、pBP—G129E—PTEN细胞低于pBP—G129R-PTEN细胞。但它们间E-cadherin水平差异无显著性。(7)RT-PCR分析显示，pBP-wt．PTEN细胞P53mRNA水平高于pBP—G129E—PTEN细胞、pBP—G129E—PTEN细胞高于