百合无症病毒16kd基因的克隆、原核表达及抗血清制备

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1、园艺学报，2016，43(5)：998–1004.ActaHorticulturaeSinica998doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0778；http：//www.ahs.ac.cn百合无症病毒16kD基因的克隆、原核表达及抗血清制备121,*冀文婕，张郑瑶，徐品三12（大连理工大学生命科学与技术学院，辽宁大连116024；大连理工大学生命与医药学院，辽宁盘锦124221）摘要：以感染百合无症病毒（LSV）的百合叶片为试材，克隆LSV16kD基因，连接到原核表达载体pET-28a（+）上。将获得的重组质

2、粒pET-28a（+）+16kD转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导得到了高效表达的16kD蛋白，融合蛋白分子量约为20kD。融合蛋白经过镍柱纯化后作为抗原免疫注射小鼠，制备得到16kD蛋白抗血清。Westernblot分析显示所制备的抗血清与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应；通过ELISA检测和RT-PCR检测百合样品，证实制备的抗血清与LSV侵染的百合叶片发生了相同的特异性反应。结果表明，目的蛋白表达成功，所制备的抗血清具有特异性，可用于LSV的快速检测、免疫组织化学以及16kD蛋白功能研究。关键词：百合；百合无症病毒；16kD

3、；基因克隆；原核表达；抗血清制备中图分类号：S682.2；Q786文献标志码：A文章编号：0513-353X（2016）05-0998-07GeneClone，ProkaryoticExpressionofLilysymptomlessvirus16kDGeneandPreparationofItsPolyclonalAntibody121,*JIWen-jie，ZHANGZheng-yao，andXUPin-san12（SchoolofLifeScienceandBiotechnology，DalianUniversityofTechnol

4、ogy，Dalian，Liaoning116024，China；SchoolofLifeScienceandMedicine，DalianUniversityofTechnology，Panjin，Liaoning124221，China）Abstract：Unknowngene（16kD）wasamplifiedbyRT-PCRfromLilyleavesinfectedbyLilysymptomlessvirusandclonedintoprokaryoticexpressionvectorpET-28a（+）.Thentherecomb

5、inantplasmidvectorligatedwithHis-tagandcarried16kDgenewastransformedintoE.colistrainBL21（DE3）.InducedwithIPTG，theproteinwashighlyexpressioninE.coliandthemolecularweightofthe2+recombinantprotein16kDwas20kD.AfterpurificationwithNi-NTAaffinitychromatography，polyclonalantibody1

6、6kDwasraisedinmouses.Westernblotanalysisshowedthattheantiserumreactedspeciallywith16kDproteinofLSV；ELISAandRT-PCRalsoconfirmedthattheantiserumreactedspeciallywithlilyleavesinfectedbyLSV.Ourresultsindicatethattheinterestproteinexpressionwasdetected，theantiserumreactedspecial

7、lywith16kDproteinandusedforLSVrapidtest，immunohistochemistryandfunctionalstudyof16kDprotein.Keywords：lily；Lilysymptomlessvirus；16kD；geneclone；prokaryoticexpression；antiserumpreparation收稿日期：2015–12–21；修回日期：2016–04–26基金项目：国家自然科学基金项目（31070621）*通信作者Authorforcorrespondence（E-mai

8、l：xupinsan@sina.com）冀文婕，张郑瑶，徐品三.百合无症病毒16kD基因的克隆、原核表达及抗血清制备.园艺学报，2016，43(5)：998–100