黄瓜绿斑驳花叶病毒外壳蛋白基因原核表达及抗血清制备

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1、黄瓜绿斑驳花叶病毒外壳蛋白基因原核表达及抗血清制备　　摘要：将黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumbergreenmottlemosaicvirus，CGMMV）的外壳蛋白（coatprotein，CP）基因克隆到原核表达载体pEHISTEV上获得pEHISTEV-CGMMV-CP，转化大肠杆菌Rosetta，经IPTG诱导，表达出分子量为19.5kD的CGMMVCP融合蛋白。切胶回收诱导表达的CGMMVCP免疫家兔，制备抗血清。WesternBlotting检测发现，制备的抗血清能与CGMMVCP发生特异

2、性免疫反应，与同属的烟草花叶病毒（Tobaccomosaicvirus，TMV）无反应。琼脂双扩散试验测定，制备抗血清的效价为1∶16，ELISA测定效价为1∶1024。该血清特异性强、效价高，可用于CGMMV的检测关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒；外壳蛋白基因；原核表达；抗血清中图分类号：S436.421.1：Q784文献标识号：A文章编号：1001-4942（2017）05-0010-04ProkaryoticExpressionandAntiserumPreparationofCucumbergree

3、nmottlemosaicvirusCoatProteinGeneLiuJin1，LiYiqing2，HuangXiande1，Fang10Le1，LiXiangdong1，TianYanping1（1.DepartmentofPlantPathology，CollegeofPlantProtection，ShandongAgriculturalUniversity，Taian271018，China；2.CollegeofBiologicalScienceandTechnology，BeijingF

4、orestryUniversity，Beijing100083，China）AbstractThecoatprotein（CP）geneofCucumbergreenmottlemosaicvirus（CGMMV）wasclonedintotheprokaryoticexpressionvectorpEHISTEVtoproducepEHISTEV-CGMMV-CP，whichwastransformedintocompetentcellsofEscherichiacoliRosetta.Uponin

5、ductionwithIPTG，afusionproteinof19.5kDwasexpressedfromthevectorpEHISTEV-CGMMV-CP.Thefusionproteinwasrecoveredfromthegelandusedtoimmunizerabbitforantiserumpreparation.TheresultantantiserumshowedstrongpositivereactionwithCPofCGMMV，butnotwiththatofTobaccom

6、osaicvirus，inWesternBlottingassay.Thetitterofantiserumwas1∶16inagaroseimmunodiffusionand1∶1024inELISA.TheantiserumpreparedinthisresearchhadhightiterandspecificityandcouldbeusedinthedetectionofCGMMV.10KeywordsCucumbergreenmottlemosaicvirus；CPgene；Prokary

7、oticexpression；Antiserum�S瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumbergreenmottlemosaicvirus，CGMMV）属于烟草花叶病毒属（Tobamovirus）帚状病毒科（Virgaviridae）[1]。该病毒主要侵染黄瓜（Cucumissativus）、葫芦（Lagenariasiceraria）、甜瓜（Cucumismelo）、丝瓜（Luffacylindrica）、苦瓜（Momordicacharantia）、西瓜（Citrulluslanatus）等葫芦科作物，常

8、造成重大的经济损失。此外，CGMMV还侵染�{色藜（Chenopodiumamaranticolor）等藜科植物以及模式植物本氏烟（Nicotianabenthamiana）等[2-7]。CGMMV粒子呈直杆状，约300nm×18nm，基因组为线性正单链RNA，全长约6400个核苷酸，主要由两端的非翻译区（untranslatedregion，UTR）和中间的4个开放阅读框（openreadingframe，ORF）组成，其中ORF4编码17.3kD的外