黄瓜绿斑驳花叶病毒全序列测定及其抗血清制备与应用的研究

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1、学校代码１０３４５研究类聋］基础研究淡兵巧絶大變Ｈｉ卢ＺＨＥＪＩ沒ＩＡＮＧＮＯＲＭＡＬＵＮＩＶＥＲＳＴＹｃ、＂如抑硕去学位论文题目：黄瓜绿斑驳花叶病毒全序列测定及其抗血清制备与应用的研究学科专业：植物学年级：２０１２级学号：２０１２２１０６０９研究生；陈剑平研究员：肖彩利指导教师Ｖ燕飞研究员中函分类号：０９４５．８论文提交时间：２０１５年３月２５曰分类号０９４５．８硕壬学位论文黄瓜绿斑驳花叶病毒全序列测定及其抗血清制备与应用的研究论文作者

2、指导教师巧名、瓜蘇陈剑平研究员燕飞研究员由请学俭级則硕±学科专业植物学疫养单化浙江师范大学＆浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所旅女握々时巧２０１５年３月论文觀时间２０１５年５月１９日２０１５年６月学位授予单位与曰巧浙江师范大学答雜寒员会幸席马伯军教授论文评阅人２０１５年５月１９日ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒＭａｓｔｅｒｃｏｕｒｓｅＳＥＱＵＥＮＣＩＮＧＯＦＣＵＣＵＭＢＥＲＧＲＥＥＮＭＯＴＴＬＥＭＯＳＡＩＣＶＩＲＵＳＡＮＤＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯ

3、ＦＤＩＳＥＡ化ＵＳＩＮＧＴＨＥＰＲＥＰＡＲＥＤＡＮＴＩＳＥＲＵＭＣａｎ出ｄａｔｅ：ＸｉａｏＣａｉｌｉＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＰｒｏｆｅｓｓｏｒＣｈｅｎ？ＴｉａｎｐｉｎｇＰｒｏｆｅｓｓｏｒＹａｎＦｅｉＤｉｓｃｉｌｉｎｅ：ＢｏｔａｎｙｐＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙ＆ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＺｈｅｊｉａｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎｈｕａ３２１００４Ｍａｙ１９，２０１５本研究受农业部公益性行业（农业）科硏专项（项目编号：２０１３０３０２８

4、、２０１４０３０３２）和渐江省农科院科按创新能力提升工程项目资助＂研究工作在浙江省农业科学院浙江省植物有害生物巧控重＂点实验室—省部共建国家重点实验室培育基地完成ＴｈｉｓｗｏｒｋｗａｓｆｉｎａｎｃｉａｌｌｙｓｕｏｒｔｅｄｂｔｈｅＰｒｏｒａｍｏｆＶｅｅｔａｂｌｅｐｐｙｇｇＶｉｒｕｓＤｉｓｅａｓｅＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｔｒｏｌ（２０１３０３０２８＼２０１４０３０３２），ＰｒｏｒａｍｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＡｂｉｌｉｔｙＰｒｏｍｏｔｉｏｎｏｆ

5、ＺｈｅｉａｎｇｊｇＡｃａｄｅｍｏｆＳｃｉｅｎｃｅ．ｙＴｈｉｓｗｏｒｋｗａｓｄｏｎｅｉｎｔｈｅＳｔａｔｅＫｅＬａｂｏｒａｔｏｒＢｒｅｅｄｉｎＢａｓｅｙｙｇｆｏｒＺｈｅｉａｎｇＳｕｓｔａｉｎａｂｌｅＰｅｓｔａｎｄＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌ．ｊ黄瓜绿斑驳花叶巧毒全序列測定及其抗血清制备与应用的研巧摘要黄瓜绿斑驳花叶病毒（Ｃｕｃｕｍｂ巧ｇｒｅｅｎｍｏｔｌｅｍｏｓａｉｃｖｉｍｓ，ＣＧＭＭＶ）是侵、染葫芦科作物的重要病毒，近年来在我国多个省市均有报道，严重威胁葫

6、芦科作物的生产。本研究对浙江省采集的表现斑驳、花叶、崎形的甜瓜、西瓜和辄瓜叶片样品－进行ＲＴＰＣ民鉴定，并通过分段扩增测序的方法拼接获得了来自甜瓜、西瓜和魏瓜的３个ＣＧＭＭＶ分离物基因组全序列。序列分析结果湿示：３个病毒分离物基因组全序列具有烟草花叶病毒属典型基因组结构特征，全部由６４２３ｎｔ构成；３－个全序列间的核昔酸同源性高达９９．１１９９．６７％，编码的外壳蛋白氨基酸同源性为１００％。对所有已报道全序列的ＣＧＭＭＶ分离物进行系统进化分析发现，ＣＧＭＭＶ不同分离物形成２个进化相关群体，３个浙江ＣＧ

7、ＭＭＶ分离物巧位于第Ｉ姐内，与已报道的中国ＣＧＭＭＶ分离物和韩国ＣＧＭＭＶ分离物亲缘性较商。为明确ＣＧＭＭＶ在浙江、上海地区的发生、分布情况，本研巧通过原核表达ＣＧＭＭＶＣＰ蛋白，制备了ＣＧＭＭＶＣＰ抗血清，并应用于浙江省和上海市葫Ｄｏ－芦科作物疑似感病样品的ｔＥＬＩＳＡ检测。检测结果表明，ＣＧＭＭＶ在浙江省和上海市的葫芦科作物上普遍存在，且郭瓜、黄瓜、甜瓜和西瓜是其主要的寄主。在浙江省嘉善、海宁、绍兴、临安、慈溪地区都检测到了ＣＧＭＭＶ，且疑似样品检出率均在７８％Ｗ上。在上海市只在奉贤区、金山区、青

8、浦区、嘉定区检测到ＣＧＭＭＶ。ｉ在ＣＧＭＭＶ的防控方面，我们探索了基于ａｍＲＮＡ的ＣＧＭＭＶ防控技术。ｍ－成功构建了针对ＣＧＭＭＶ的ａｍｉＲＮＡ，命名为ａｉＲＣＧＭＭＶ，将其转入农杆菌，１２ｈ并采用农杆