菜豆荚斑驳病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达-论文.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2013，41(5)：1916—1917，2164责任编辑朱琼琼责任校对卢瑶菜豆荚斑驳病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达魏晓棠，白桦，尼秀媚，张京宣，宋涛(1．山东出入境检验检疫局，山东青岛266002；2．青岛出入境检验检疫局，山东青岛266000)摘要[目的]克隆菜豆荚斑驳病毒(BPMV)外壳蛋白(cP)基因，并对其进行原核表达。[方法]利用RT·PCR方法克隆BPMVcP基因，将其连接至pMD19一TSimple载体后对阳性克隆进行测序，检

2、测其与已知病毒外壳蛋白基因序列的同源性；将cP基因定向插入双酶切的pET30a，构建其原核表达载体并转化大肠杆菌BL-21表达重组蛋白。[结果]试验克隆得到的cP基因大小为1122bp，与NCBI中目标基因的相似度达99％以上；试验成功构建了原核表达栽体pET30a—BPMVCP，发现重组蛋白在37oC、1．0mmol／LIPTG诱导4h条件下表达量最高。[结论】该研究为BPMV抗血清的制备与液相芯片检测方法的建立奠定了基础。关键词菜豆荚斑驳病毒；外壳蛋白；表达中图分类号S643．1文献标识码A文章编号

3、0517-6611(2013)05—01916—02CloningandProkaryoticExpressionofCoatProteinGenefromBeanPodMottleVirusⅥIXiao-tangetai(ShandongEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau，Qingdao，Shandong266002)Abstract[Objective]111epaperwastoclonethecoatprotein(cP)genefrombeanpod

4、mottlevirus(BPMV)andexpressitinprokaryote．1MethodlTheBPMVCPgenewasobtainedbyusingRT—PCRmethod．anditwasconnectedtothepMD19一TSimplevectortosequencetheposi—tireclonesanddetectthehomologybetweentheCPgeneandtheknownviruscoatproteingenesequence．TheCPgenewasins

5、ertedintothedoubleenzymedigestivepET30atoconstructtheprokaryoticexpressionvector．andtherecombinantproteinwasexpressedaftertransformedintoEsckrichiacoliBL-21．1ResultlI’hesizeoftheobtainedCPgenewas1122bp．andthesimilaritywiththeNCBItargetgeneexceeded99％：the

6、prokaryoticexpressionvectorpET30a—BPMVCPwasconstructedsuccessfully．anditfoundthattherecombinantproteinhadhighestexpressionlevelwhenitwasinducedat37oCfor4hwith1lnlno1／LIfrrG．{ConclusionlI1hestudylaidthefoundationforthepreparationofBPMVantise．rumandconstru

7、ctionofliquidphasechipdetectionmethod．KeYwordsBeanpodmottlevirus：Coatprotein：Expression菜豆荚斑驳病毒(Beanpodmottlevirus，BPMV)隶属豇1材料与方法豆花叶病毒科豇豆花叶病毒属，是一种正链RNA病毒，其基1．1材料因组由正链RNA．1(约3．6kb)和RNA-2(约6．0kb)组成，分1．1．1毒株。菜豆荚斑驳病毒BPMV，购自CMCC，并经过别包裹在直径为28liB的球状病毒粒体中，其中RNA-2

8、编码验证可用。运动蛋白(MP)和外壳蛋白(cP)⋯。1948年，Zaumeyer等在1．1．2试剂。植物病毒RNA提取试剂盒、OnestepRNA菜豆上首次报道了BPMV，该病毒主要危害大豆、菜豆等豆PCRkit、凝胶回收试剂盒、PCR产物回收试剂盒、反转录试剂科植物，可造成大豆、荚和种子斑驳，甚至坏死，直至植株死盒、大肠杆菌DH5c~、感受态细胞及大肠杆菌BL-21(DE3)感亡。受BPMV侵染的大豆，易受到拟茎点霉属(Phomopsis