大豆GmNAC8 基因克隆与原核表达-论文.pdf

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1、江苏农业学报(Jiangsul，．oy’Agr．Sci．)，2013，29(4)：734～737734http：／／wwW．jSnYxb．c0m刘晓庆，徐照龙，许玲，等．大豆GmNAC8基因克隆与原核表达[J]．江苏农业学报，2013，29(4)：734—737dot：10．3969／j．issn．1000-4440．2013．04．007大豆GmNAC8基因克隆与原核表达刘晓庆，徐照龙，许玲，黄益洪，何晓兰，张大勇，马鸿翔(江苏省农业科学院农业生物技术研究所／江苏省农业生物学重点实验室，江苏南京210014)摘要：为了进一步明确GmN

2、AC8基因的功能，设计带有NdeI和XbaI双酶切位点引物，从大豆根系cDNA中克隆到GmNAC8基因全长ORF(Openreadingframe)，编码蛋白质分子质量为37000，理论等电点为6．43。将扩增片段免隆至原核表达载体pCZN1，构建重组质粒pCZN1一GmNAC8，经过酶切和PCR验证，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，0．2mmol／LIPTG诱导后，经SDS—PAGE电泳检测获得了目的蛋白质，该蛋白质主要以包涵体的形式存在，通过镍柱子纯化获得纯化蛋白质，然后利用His标签蛋白质作为抗体进行Western—blot

3、分析，证明所纯化蛋白质为目的蛋白质。关键词：GmNA；基因克隆；原核表达中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000-4440(2013)04．0734-04CloningandprokaryoticexpressionofGmNAC8geneisolatedfromsoybeanLIUXiao—qing，XUZhao-long，XULing，HUANGYi—hong，HEXiao-lanZHANGDa—yong，，MAHong—xiang(InstituteAgro—biotechnology，JiangsuAcademy

4、ofAgriculturalSciences，ProvincialKeyLaboratoryofAgrobiology，Nanjing210014，China)Abstract：InordertofurtherdefnethefunctionofGmNAC8gene．thewholeopenreadingflarecofGmNAC8WasclonedfromsoybeanrootswiththeprimerscarryingNdeIandXbaIrestrictionsites．encoding283amim)acidswithaeal

5、cu—late(1mo]ecularmassof37000andatheoretiealpIof6．43．ThefragmentwastransformedintoaprokaryoticexpressionvectorpCZN1．AfterdigestionandPCRverification，therecombinantplasmidpCZN1一GmNAC8wasintroducedintoEscherichiacoliBI21(DE3)．SDS—PAGEanalysisshowedthatthefusionproteininduc

6、edwith0．2mm0L／LIPrGwassueeessfunvexpressedinE．colBL21(DE3)．andexistedmainlyinformofinclusionbodies．ThespecificreactionofNiresinpurifiedDroteinex—pressedinprokaryoticcellswithHistagproteinrevealedbywestern—blotanalysisconfirmedthetargetprotein．Keywords：GmNAC8；genecloning；

7、prokaryoticexpressionNAC转录因子是植物特有的一类转录因子，该家族转录因子的一个共同特点是N端为收稿日期：2013-02*28基金项目：国家自然科学基金项目[31101166、30971798]；江苏省农保守的大约150个氨基酸的NAC结构域，C端为高业科技自主创新基金项目[CX(12)5021]；江苏省自然科度变异的转录调控区。。它们在植物生长发学壤金项目(BK2010474)；国家科技支撑计划项目育、激素调节和抵御逆境等方面发挥着重要(2011BAI)35B06—3-4)的作用。NAC可以通过与靶标基因启动子中

8、特定作者简介：刘晓庆(1982一)，女，江苏如皋人，博士，助理研究员，主要的DNA序列结合，激活或抑制靶标基因的转录表从事植物抗逆机制研究。(Te1)025．84391105；(E．mail)li．uxia