栽培大豆Rubisco小亚基基因（rbcS）全长cDNA的克隆及原核表达-论文.pdf

《栽培大豆Rubisco小亚基基因（rbcS）全长cDNA的克隆及原核表达-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中国油料作物学报2014，36(3)：329—333ChineseJournalofOilCropSciencesdoi：10．7505／j．issn．1007—9084．2014．03．006栽培大豆Rubisco小亚基基因(rbcS)全长cDNA的克隆及原核表达崔喜艳，董雅致。，刘晓庆，张治安(1．吉林农业大学生命科学学院，吉林长春，130118；2．吉林农业大学农学院，吉林长春，130118)摘要：根据NCBI中发表的大豆Rubisco小亚基基因(rbcS)序列(AF303939—1)设计

2、特异引物，以吉农13大豆为实验材料，采用Trizol法提取叶片总RNA，通过RT—PCR克隆大豆rbcS的cDNA。将该基因与原核表达载体pET一30a(+)连接。转化大肠杆菌E．coliBL21感受态细胞，双酶切鉴定后筛选阳性克隆，测序结果显示：rbcS全长696bp，其中开放阅读框为537bp，编码178个氨基酸；选择含大豆rbcScDNA阳性克隆菌液IPTG诱导，经SDS—PAGE分析，诱导表达出分子量为29．1kDa的融合蛋白，表达产物大小与预计理论值相符。诱导7h蛋白表达量最高，为64

3、．15％。关键词：栽培大豆；rbcS；基因克隆；原核表达中圈分类号：Q785，$565．103文献标识码：A文章编号：1007—9084(2014)03—0329—05Cloningandprokaryoticexpressionoffull—-lengthcDNAofRubiscosmallsubunitgene(rbcS)inGlyinemaxCUIXi—yan，DONGYa—zhi，LIUXiao—qing，ZHANGZhi—an(1．SchoolofLifeSciences，JilinA

4、griculturalUniversity，Changchun130118，China；2．CollegeofAgronomy，JilinAgriculturalUnivenity，Changchun130118，China)Abstract：ThespecificprimersweredesignedforrbcSgenebasedonthepubhshedsequence(AF303939—1)inNCBI．TotalRNAwasisolatedusingTrizolmethodfromth

5、eseedlingleavesofsoybeanvarietyJinong13andthefulllengthcDNAofrbcSwasamplifiedbymeansofreversetranscription—polymerasechainreaction(RT—PCR)．TheamplifiedfragmentwasligatedtotheprokaryoticexpressionvectorpET一30a(+)andtransformedintoE．coliBL21competentce

6、lls．Thepositivecloneswereidentifiedbydoubleenzymedigestion．Thesequencingresultsindi-catedthatthecompletecDNAsequenceofrbcSgenewas696bpwitha537bpORF(openreadingframe)anden—coded178aminoacids．A29．1kDafusionproteinwasexpressedforrbcSbyIPTGinductionthrou

7、ghSDS—PAGEanalysis．Thesizeofexpressionproductmatchedwithanticipatedtheoreticalvalue．Theproteinexpressionquantitywasmaximum(64．15％)at7hourinduction．Keywords：Glycinemax；rbcS；Genecloning；Prokaryoticexpression1，5一二磷酸核酮糖羧加氧酶(Rubisco，E．列比较稳定，rbcL序列多用于植物的系统

8、发育研c．4．1．1．39)存在于所有高等植物中，是光合作用究，来确定生物种属间差异_3l4；rbcS由细胞核基因的关键酶，含量约占可溶性总蛋白的50％。编码，具有调控Rubisco活性的功能J。为了提高Rubisco由8个大亚基(rbcL)和8个小亚基(rbcS)植物固定CO的能力和光合效率，人们在Rubisco大组成。在Rubisco全酶中，rbcL主要起催化作用。小亚基结构、功能等方面进行了大量的研究，目前已rbcL由叶绿体基因组编码，叶绿体基因组的碱基序有多种生物的rbcL、rbcS结构