栽培大豆rubisco小亚基基因_rbcs_全长cdna的克隆及原核表达

《栽培大豆rubisco小亚基基因_rbcs_全长cdna的克隆及原核表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中国油料作物学报2014，36(3):329－333ChineseJournalofOilCropSciencesdoi:10．7505/j．issn．1007－9084．2014．03．006栽培大豆Ｒubisco小亚基基因(rbcS)全长cDNA的克隆及原核表达1212*崔喜艳，董雅致，刘晓庆，张治安(1．吉林农业大学生命科学学院，吉林长春，130118;2．吉林农业大学农学院，吉林长春，130118)摘要:根据NCBI中发表的大豆Ｒubisco小亚基基因(rbcS)序列(AF303939－1)设计特异引物，以吉农13大豆为实验材料，

2、采用Trizol法提取叶片总ＲNA，通过ＲT－PCＲ克隆大豆rbcS的cDNA。将该基因与原核表达载体pET－30a(+)连接，转化大肠杆菌E．coliBL21感受态细胞，双酶切鉴定后筛选阳性克隆，测序结果显示:rbcS全长696bp，其中开放阅读框为537bp，编码178个氨基酸;选择含大豆rbcScDNA阳性克隆菌液IPTG诱导，经SDS－PAGE分析，诱导表达出分子量为29．1kDa的融合蛋白，表达产物大小与预计理论值相符。诱导7h蛋白表达量最高，为64．15%。关键词:栽培大豆;rbcS;基因克隆;原核表达中图分类号:Q785，S

3、565．103文献标识码:A文章编号:1007－9084(2014)03－0329－05Cloningandprokaryoticexpressionoffull－lengthcDNAofＲubiscosmallsubunitgene(rbcS)inGlyinemax1212*CUIXi－yan，DONGYa－zhi，LIUXiao－qing，ZHANGZhi－an(1．SchoolofLifeSciences，JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118，China;2．CollegeofAgr

4、onomy，JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118，China)Abstract:ThespecificprimersweredesignedforrbcSgenebasedonthepublishedsequence(AF303939－1)inNCBI．TotalＲNAwasisolatedusingTrizolmethodfromtheseedlingleavesofsoybeanvarietyJinong13andthefulllengthcDNAofrbcSwasamplifiedb

5、ymeansofreversetranscription－polymerasechainreaction(ＲT－PCＲ)．TheamplifiedfragmentwasligatedtotheprokaryoticexpressionvectorpET－30a(+)andtransformedintoE．coliBL21competentcells．Thepositivecloneswereidentifiedbydoubleenzymedigestion．Thesequencingresultsindi-catedthatthecomp

6、letecDNAsequenceofrbcSgenewas696bpwitha537bpOＲF(openreadingframe)anden-coded178aminoacids．A29．1kDafusionproteinwasexpressedforrbcSbyIPTGinductionthroughSDS－PAGEanalysis．Thesizeofexpressionproductmatchedwithanticipatedtheoreticalvalue．Theproteinexpressionquantitywasmaximum

7、(64．15%)at7hourinduction．Keywords:Glycinemax;rbcS;Genecloning;Prokaryoticexpression1，5－二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(Ｒubisco，E．列比较稳定，rbcL序列多用于植物的系统发育研［3，4］C．4．1．1．39)存在于所有高等植物中，是光合作用究，来确定生物种属间差异;rbcS由细胞核基因［1，2］［5］的关键酶，含量约占可溶性总蛋白的50%。编码，具有调控Ｒubisco活性的功能。为了提高Ｒubisco由8个大亚基(rbcL)和8个小亚基(rbcS)植

8、物固定CO2的能力和光合效率，人们在Ｒubisco大组成。在Ｒubisco全酶中，rbcL主要起催化作用。小亚基结构、功能等方面进行了大量的研究，目前已［6～12］rbcL由叶绿体基因组编码，