细丝蛋白a调控egfr活化对肺腺癌细胞增殖和转移的影响

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1、一虢捌翩蹲莘缘净二谬睁芋蜀。＆莎x．』≯年，罗局形扫研究生签名：剡l箭莲翩裤耋鬓‰刁日又。f夕年芗月≯．／日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．‘⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文细丝蛋白A调控EGFR活化对肺腺癌细胞增殖和转移的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11材料与方法⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯29匀口才≮⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯么y附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50综述细丝蛋白A与肺癌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．54致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯67个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯68中文摘要细丝蛋白A调控EGFR活化对肺腺癌细胞增殖和转移的影响摘要肺癌是目前世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，每年都有超过一百万新发病例，其中约80％为非小细胞肺癌(non．smallcelllungcancer,NSCLC)。作为一种全身性疾病，肺癌发生、发展、转移及复发是由多条信号转导通路调节，多因素参与的复杂过程。对肿瘤信号转导通路的研究有助于阐明NSCLC的发病机制，为NSCLC的治疗提供新的分子靶点。表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)为具有酪氨酸

4、激酶活性的受体，分子量170kDa(1186氨基酸)，位于染色体7q12。EGFR家族有4个结构相似的受体分子：ErbBl(EGFR)、ErbB2(HER2)、ErbB3(脏R3)、ErbB4(髓R4)。EGFR为跨膜受体，有细胞外的配体结合区域，跨膜区和细胞内的酪氨酸激酶活性区域组成。EGFR具有酪氨酸激酶活性，通过与配体结合，EGFR形成同源或异源二聚体而活化，进一步激活受体介导的多条信号转导通路，如Ras／Ra抓伍刚EIⅨ、P13K／Akt通路等，发挥促进肿瘤增殖、侵袭、转移及肿瘤血管生成作用。EGFR由表皮生长因子(e

5、pidermalgrowthfactor，EGF)激活，调节正常和恶性上皮细胞的生长、分化和存活。EGFR在40．80％的NSCLC过表达中表达，而且其表达与预后不佳相关。因此，EGFR和它的家族成员已成为靶向治疗的主要候选靶分子。NSCLC患者EGFR过表达，往往提示TNM分期晚，出现淋巴结转移的可能性大，进展快，预后不良。细丝蛋白A(filaminA，FLNa)是非肌性肌动蛋白结合蛋白，基因结构高度保守，表达广泛，对哺乳动物的生长发育具有重要的作用。FLNa蛋白包括一个肌动蛋白结合结构域和24个串联的重复序列，研究发现FL

6、Na重复序列所形成的类似免疫球蛋白样结构的多重p．折叠片层结构，为蛋白质．蛋白质相互作用提供了界面。FLNa涉及多条与肿瘤形成有关的信号转导通路，如MAPK／ERK、P13K／Akt、TGF．D等，影响肿瘤细胞的增殖、粘附、迁移和侵袭等行为。许多研究表明，FLNa在人类上皮肿瘤例如肝癌、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、结直肠癌等多种肿瘤表达增多。Zhu认为FLNa对于人黑色素瘤细胞EGFR的活化具有调控作用。FLNa中文摘要是否调控肺腺癌细胞EGFR的活化目前尚无报道。本研究拟通过：(1)Westernblot检测不同肺腺癌细胞中FL

7、Na、EGFR蛋白的表达情况；(2)采用MTT法检测5种不同肺腺癌细胞的增殖能力；(3)质粒转染技术沉默FLNa的表达，构建稳定转染细胞，采用MTT法、划痕修复实验(Woundhealingassay)及Transwell法(Transwellcellinvasionassay)检测稳定转染细胞的增殖、迁移和侵袭能力；(4)利用westernblot、免疫共沉淀法(Immunoprecipitation，IP)检测EGFR磷酸化水平及其下游信号通路分子的变化。旨在从细胞、分子水平上分析FLNa对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

8、，探讨FLNa调控EGFR磷酸化及其下游信号分子的作用机制，为更有效治疗肺腺癌提供新靶点。目的：观察不同肺腺癌细胞FLNa和EGFR的表达情况，分析FLNa、EGFR与肺腺癌细胞增殖的关系；将pSIFl一FLNasiRNA质粒转染GLC．82细胞，降低FLNa的表达水平，观察