白藜芦醇对肺腺癌细胞增殖和cxcr4表达的影响

《白藜芦醇对肺腺癌细胞增殖和cxcr4表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、·588·中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2012Apr；28(4)：588～9网络出版时间：2012—3—2716：15网络出版地址：http：／／www．cnki．neVkcms／detail／34．1086．R．20120327．1615．201204．588_034．html◇研究简报◇白藜芦醇对肺腺癌细胞增殖和cxCR4表达的影响李济元r，王卫华，张彦梅，师秀琴(郑州大学1．基础医学院、2．第一附属医院，河南郑州450052)Efectsofresverat

2、rolonproliferationandexpres-度为50、100和150I~mol·L白藜芦醇液20l，经孵育后，sionofCXCR4inhumanlungadenocarcinoma加入DMSO150l振荡。用酶标仪在波长590nm处测定吸光值(A)，细胞抑制率／％=(1一细胞药物组平均A值／空白A549cells对照组平均A值)×100％。UJi．yuan，一，WANGWei—hua，ZHANGYan—mei，1．2．3RTPCR检测CXCR4mRNA的表达根据MTF实验SHIXiu—qin结果

3、，在A549细胞培养液中加入质量浓度100Ixmol·L(1．BasicMedicalCollegeofZhengzhouUniversity；2．theFirst白藜芦醇液2O，提取细胞中的总RNA，逆转录eDNA并AffiliatedHo~italofZhengzhouUniversity，Zhengzhou扩增目的基因。引物序列为：CXCR4上游引物5-450052，China)GAAGCTCTrGGTGAAAAGG-3，下游引物5r_GAGTCGAdoi：10．3969／j．issn．1001—197

4、8．2012．04．034TGCTGATCCCAAT-3-，扩增产物长度为326bp；GAPDH上游文献标识码：A文章编号：1001—1978(2012)04—0588—02引物5一TGGATCAGCAAGCAGGAGTATGACGAGT一3，下游引中国图书分类号：R284．1；R329．24；R392．11；R734．202．2；物5-CGCAAGTrAGGqqqq'GTCAAGAAAGGGT一3，扩增产物R979．1长度484bp。以GAPDH作为内参照，PCR产物经琼脂糖凝关键词：白藜芦醇；肺癌；A54

5、9细胞；细胞增殖；CXCR4胶电泳，BioRad凝胶成像分析系统下照相并扫描分析。Keywords：resveratrol；lungcancer；A549cells；proliferation；1．2．4Westernblot检测CXCR4蛋白的表达收集空白对CXCR4照组和Res组处理过的48h后的细胞，裂解细胞并提取总蛋白。经电泳、转膜后，5％脱脂牛奶封闭，一抗4℃孵育过肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一，临床以早期夜，加入相应二抗孵育，用ECL发光法检测目的条带的表转移和预后极差为特点。由于CXCR4

6、表达于多种肿瘤细胞达。中J，并且与肿瘤细胞远处转移密切相关，因此，CXCR41．3统计学分析采用SPSS17．0统计学软件处理，均数的作用越来越受到人们的重视。白藜芦醇(reveratrol，Res)之间的比较用单因素方差分析，结果用±S表示。可以抑制多种癌细胞的生长j，本实验拟通过研究白藜芦醇2结果对肺癌细胞CXCR4表达的影响来揭示其作用机制。2．1MTT结果白藜芦醇对A549细胞的生长抑制作用具1材料与方法有对质量浓度和作用时间的依赖性。Res对A549细胞的抑1．1材料噻唑蓝(MTT)和胎牛血清购自美

7、国的Gibco公制率在质量浓度为100Ixmol·L作用48h后最明显司。白藜芦醇为美国Sigma公司产品。兔抗人CXCR4一抗(52．1％)，与质量浓度为150t~mol·L和作用48h的抑制购白美国的SantaCruz，山羊抗兔二抗购自北京中杉公司，率(56％)相近。PCR提取及扩增试剂盒购自上海捷锐生物有限公司。West—2．2RT-PCR测得CXCR4mRNA的表达实验结果显示ernblot内参GAPDH购自杭州贤至生物有限公司。白藜芦醇可以抑制CXCR4mRNA的表达，并且这种作用亦1．2方法具有时

8、问依赖性。在Res作用48h后CXCR4的表达只有空1．2．1细胞培养A549用RPMI1640培养基在37℃、体积白对照组的34．66％。单因素方差分析显示3者之间差异分数5％CO，及饱和湿度的条件下培养。有统计学意义(P<0．05)。1．2．2MTT法检测A549细胞增殖取生长期的A549细2．3Westernblot测得CXCR4在细胞中的表达CXCR4胞，接种于96孔培养板中，分为4组：空白