姜黄素对人肺腺癌a549-ddp细胞增殖活性的影响

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1、姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响【摘要】　　目的：探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法：采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线，MTT法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h后，Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞核形态，流式细胞仪检测细胞凋亡率.以20μmol/L的姜黄素作用细胞24h后，流式细胞仪分析细胞周期.结果：亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似，倍增时间分别为（33.24±0.24）

2、h和（32.88±0.11）h（P＞0.05）；顺铂处理A549和A549/DDP细胞72h后，半数抑制浓度（IC50）分别为13.57μmol/L和146.79μmol/L，A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数为10.82.姜黄素对A549/DDP细胞增殖有抑制作用，并且呈时间浓度依赖性（P＜0.05）.姜黄素作用后，Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小变形，致密浓染荧光成团块分布.流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系（P＜0.05）.20μmol/L的姜黄素作用细胞24h，引发G2期阻滞.结论：姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制

3、作用,并呈时间、浓度依赖.其作用可能是通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的.【关键词】姜黄素；肺肿瘤；A549/DDP细胞；细胞凋亡；细胞周期【Abstract】AIM:ToexploretheeffectofcurcuminonproliferationofhumanlungadenocarcinomacelllineA549/DDP.METHODS:CellcountingineasuredbyMTTassay.Afterthecellsin,cellularmorphologyicroscope.Cellcycleanalysisandapoptosisra

4、teetry.RESULTS:ThecellgroilartothatofA549/DDPcells.ThedoublinggenerationtimeofA549cellsandA549/DDPcellsentol/Land146.79μmol/L,respectively,inonA549/DDPcellsedependentmanners(P＜0.05).Underfluorescencemicroscope,cellstreatedinshoerated.TheapoptosisrateofA549/DDPcellsinducedbycurcuminarkab

5、lyhigherthanthatofthecontrolcells,andcellcycleanalysisshoinexertsinhibitoryeffectsonproliferationofA549/DDPcellsindosedependentandtimedependentmannerspossiblythroughinducingcellcyclearrestandcellapoptosis.【Keyin;lungneoplasms;A549/DDPcell;apoptosis;cellcycle　　0引言非小细胞肺癌（nonsmallcelllung

6、cancer,NSCLC）早期多无症状，就诊时患者疾病已属晚期，因此治疗上多采取以化疗为主的综合治疗.顺铂（cisplatin,DDP）具有广泛的抗瘤谱，是NSCLC化疗方案中的一线药物.但随着晚期肺癌患者化疗的开展，DDP的获得性耐药问题日益严重，制约了其疗效的发挥.姜黄素（Curcumin,C12H36O5,FTT），二甲基亚砜（DMSO），胰酶均为美国Sigma公司产品；DDP为山东齐鲁医药有限公司产品；Hoechst33258染色试剂盒为碧云天公司产品；PI和AnnexinVFITC均为BD公司产品；RPMI1640培养基为Gibco公司产品；胎牛血清为杭州四

7、季清公司产品；其余试剂均为国产分析纯.姜黄素用DMSO溶解配制成终浓度为40mmol/L的母液，过滤除菌，避光存储于-20℃备用，每次实验前用培养液稀释至所需浓度（DMSO终浓度<1/1000）.1.2方法1.2.1细胞培养与传代在37℃,50mL/LCO2饱和湿度条件下，将A549细胞培养在RPMI1640培养液中（含100mL/L胎牛血清，青霉素和链霉素各100U/mL），2.5g/L胰蛋白酶消化传代.为保持A549/DDP的耐药性，该细胞需培养在含DDP6μmol/L的上述培养液中，于实验的前2d更换为无DDP的上述RPMI1