热化疗联合对人肺腺癌耐药细胞株a549-ddp作用及其

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1、热化疗联合对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP作用及其毕业：陈雪琴马胜林牟翰舟苏丹冯建国【摘要】目的观察热化疗联合对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP的影响及其机制，为临床上应用热化疗联合治疗非小细胞肺癌提供理论依据。方法CCK-8法检测A549、不同温度下A549/DDP细胞对顺铂的敏感性；流式细胞仪分析热疗对A549/DDP细胞周期分布的影响；RT-PCR检测热疗对A549/DDP细胞ERCC1表达的影响。结果亲代人肺腺癌细胞株A549对顺铂的敏感性明显高于耐药细胞株A549/DDP，不同温度加热后A549/DDP

2、细胞对顺铂的敏感性均有提高；热疗尤其是热化疗后G2/M期细胞明显增多，G0/G1期细胞明显减少（P<0.01）；热疗后A549/DDP细胞ERCC1mRNA表达未见明显改变。结论热疗能提高人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂的敏感性，热化疗具有协同作用。热化疗协同作用机制可能主要是诱导细胞周期阻滞，抑制细胞增殖，和DNA修复基因ERCC无直接相关性。【关键词】高温化学疗法肺肿瘤抗药性　　【Abjuctive】ObjectiveToobservetheeffectsandmechanismsofhyperthe

3、rmiatherapybinedotherapyonmultidrug-resistanthumanlungadenocarcinomacelllineA549/DDP,itochemotherapyforclinic.MethodsA549orA549/DDPtreatedperatureia,A549/DDPcellcycleetryandERCC1mRNAexpressionanlungadenocarcinomacellA549oresensitivetocisplatinthandrug-resistantc

4、elllineA549/DDP.Treatedperature,drugsensitivityofA549/DDPtocisplatinallincreased.Hyperthermiahadsignificanteffectoncellcycleochemotherapyorenotable（P<0.01）.Afterhyperthermia,theexpressionofERCC1mRNAdidnotchange.ConclusionHyperthermiacansignificantlyenhancethe

5、sensitivitytocisplatininhumanmultidrug-resistantlungcancercelllineA549/DDP.Thermochemotherapyhassynergisticeffectsofinhibitingcellproliferation.Themajorsynergisticmechanismsofthermochemotherapyarethattheycaninducecellcyclearrest、inhibitcellproliferation,buthaven

6、ocorrelationiaChemotherapyLungcancerDrugresistance　　肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之1，即使最佳的联合治疗，非小细胞肺癌（nonsmall-celllungcancer,NSCLC）5年生存率只有15％左右，75％晚期NSCLC患者的中位生存期只有10个月。近年来热疗因其安全有效而逐渐成为继以手术、放疗、化疗、生物治疗后的又1种抗肿瘤手段，而且与其他治疗方法有协同作用，故现正逐渐应用于肿瘤的综合治疗中。但热疗与化疗的协同作用机制错综复杂，目前尚未完全明了，故以人肺腺癌耐药

7、细胞株A549/DDP［１］为对象，观察热疗联合化疗协同抑制该耐药细胞株增殖及其机制，为临床综合治疗提供有力的依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP，重庆第3军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所建立；人肺腺癌亲代细胞株A549，浙江省肿瘤医院肿瘤研究所保存。顺铂（cisplatin,DDP）为云南××制药有限公司产品（批号：050101），CCK-8（cellcountkit）试剂盒为日本同仁化研究所产品，P－糖蛋白抗体为法国BC公司产品，PI染色ABC试剂盒为美国BD公司产品，RNA

8、提取试剂和各种PCR引物为上海生工生物工程有限公司产品，PCR反应体系为Promega公司产品。电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司）；流式细胞仪（美国BD公司）；PCR仪（杭州博日科技有限公司）。　　1.2方法　　(1)细胞培养和热疗处理将A549和A549/DDP细胞培养于RPMI-1640培养基中，37℃、5％CO2饱和湿