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时间:2018-05-03
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1、热化疗联合对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP作用及其机制的实验研究作者:陈雪琴马胜林牟翰舟苏丹冯建国【摘要】目的观察热化疗联合对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP的影响及其机制,为临床上应用热化疗联合治疗非小细胞肺癌提供理论依据。方法CCK-8法检测A549、不同温度下A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;流式细胞仪分析热疗对A549/DDP细胞周期分布的影响;RT-PCR检测热疗对A549/DDP细胞ERCC1表达的影响。结果亲代人肺腺癌细胞株A549对顺铂的敏感性明显高于耐药细胞株A549/DDP,不同温度加热后
2、A549/DDP细胞对顺铂的敏感性均有提高;热疗尤其是热化疗后G2/M期细胞明显增多,G0/G1期细胞明显减少(P<0.01);热疗后A549/DDP细胞ERCC1mRNA表达未见明显改变。结论热疗能提高人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂的敏感性,热化疗具有协同作用。热化疗协同作用机制可能主要是诱导细胞周期阻滞,抑制细胞增殖,和DNA修复基因ERCC无直接相关性。【关键词】高温化学疗法肺肿瘤抗药性 【Abjuctive】ObjectiveToobservetheeffectsandmechanismso
3、fhyperthermiatherapybinedotherapyonmultidrug-resistanthumanlungadenocarcinomacelllineA549/DDP,itochemotherapyforclinic.MethodsA549orA549/DDPtreatedperatureia,A549/DDPcellcycleetryandERCC1mRNAexpressionanlungadenocarcinomacellA549oresensitivetocisplatinthandrug-
4、resistantcelllineA549/DDP.Treatedperature,drugsensitivityofA549/DDPtocisplatinallincreased.Hyperthermiahadsignificanteffectoncellcycleochemotherapyorenotable(P<0.01).Afterhyperthermia,theexpressionofERCC1mRNAdidnotchange.ConclusionHyperthermiacansignificantl
5、yenhancethesensitivitytocisplatininhumanmultidrug-resistantlungcancercelllineA549/DDP.Thermochemotherapyhassynergisticeffectsofinhibitingcellproliferation.Themajorsynergisticmechanismsofthermochemotherapyarethattheycaninducecellcyclearrest、inhibitcellproliferat
6、ion,buthavenocorrelationiaChemotherapyLungcancerDrugresistance 肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,即使最佳的联合治疗,非小细胞肺癌(nonsmall-celllungcancer,NSCLC)五年生存率只有15%左右,75%晚期NSCLC患者的中位生存期只有10个月。近年来热疗因其安全有效而逐渐成为继以手术、放疗、化疗、生物治疗后的又一种抗肿瘤手段,而且与其他治疗方法有协同作用,故现正逐渐应用于肿瘤的综合治疗中。但热疗与化疗的协同作用机制错综复杂,目前尚未
7、完全明了,故作者以人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP[1]为对象,观察热疗联合化疗协同抑制该耐药细胞株增殖及其机制,为临床综合治疗提供有力的依据。 1材料与方法 1.1材料 人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP,重庆第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所建立;人肺腺癌亲代细胞株A549,浙江省肿瘤医院肿瘤研究所保存。顺铂(cisplatin,DDP)为云南××制药有限公司产品(批号:050101),CCK-8(cellcountkit)试剂盒为日本同仁化研究所产品,P-糖蛋白抗体为法国BC公司产品,PI染色ABC
8、试剂盒为美国BD公司产品,RNA提取试剂和各种PCR引物为上海生工生物工程有限公司产品,PCR反应体系为Promega公司产品。电热恒温水槽(上海精宏实验设备有限公司);流式细胞仪(美国BD公司);PCR仪(杭州博日科技有限公司)。 1.2方法 (1)细胞培养和热疗处理将A549和A549/DDP细胞培养于RPMI-1640培养基中,37℃
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