人肺腺癌多西他赛耐药机制的研究

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1、·468·中国肿瘤生物治疗杂志，2012年10月，19(5)目前，肺癌已经成为世界范围内发病率与病死紫杉醇类化疗药物为P一糖蛋白(P—glycoprotein，率居第一位的恶性肿瘤。在我国，肺癌已占全部P．gP)的作用底物之一，其耐药机制与MDR1基因扩恶性肿瘤病死患者的22．7％。近年来，在肺癌的不增导致的P．gP高表达密切相关。耐药谱检测发现，同病理类型中，肺腺癌的发病率明显上升，已占非小SPC．A1／DTX耐药细胞表现出对表柔比星(P—gP作细胞肺癌总数的50％以上。由于肺腺癌容易转移，用底物之一)较高的耐药性。细胞内罗丹明(P-g

2、P在诊断时3／4以上的患者已发生局部扩散或远处转的另一作用底物)蓄积实验也证实，SPC-A1／DTX耐移而失去手术的机会，对这些患者而言，以化疗为主药细胞内罗丹明蓄积较亲本SPC—A1细胞明显减的综合治疗对于延长其生存时间、提高生活质量具少。流式细胞术结果提示，SPC—A1／DTX细胞P—gP有重要价值。即使对于可手术的肺腺癌患者，术后表达水平较亲本SPC—A1细胞明显上调，使用质膜辅助化疗也是综合治疗方案的重要组成部分。药泵抑制剂维拉帕米后P—gP的表达下降。这些结多西他赛(docetaxel，DTX)是治疗非小细胞肺果均表明，P—gP

3、的高表达与SPC—A1／DTX细胞的耐癌尤其是肺腺癌的重要一线和二线用药，其作用机药表型密切相关。制为促进细胞微管聚合并抑制其解聚，致微管动力SPC．A1／DTX细胞是国内首次建成的耐DTX学异常，激活纺锤体组装检验点(spindleassembly的肺癌细胞系，为深入研究肺腺癌多药耐药机制及checkpoint，SAC)，阻滞细胞有丝分裂中期向后期的逆转策略提供了可靠的实验技术平台。从初步研究转化，使细胞周期阻滞于G／M期，并可使线粒体膜来看，经体外诱导耐药建立的SPC—A1／DTX细胞在通透性改变，引起促凋亡物质的释放，最终导致细胞体

4、内、外均表现出对DTX较高的耐药性，并呈多药凋亡l2J。然而，化疗药物普遍存在的多药耐药现象耐药特性，与亲本SPC．A1细胞的生物学特性存在限制了此类药物的疗效和更广泛的临床应用。因明显差异。但当时本课题研究焦点主要集中于质膜此，深入研究肺腺癌对DTX耐药的分子机制，不仅药泵蛋白P—gP的异常表达，即更多专注于对“多药有助于筛选出可用于临床指导DTX个体化用药的耐药”表型的探究。鉴于DTX是一类以微管为作用分子靶标，也可为耐药的干预策略研究提供研究方靶点的周期特异性化疗药物，在产生化疗耐药表型向。本文总结了从基因调控的不同层次探索肺腺癌的

5、过程中必然发生或伴有细胞增殖、凋亡及细胞周细胞DTX耐药机制的研究进展，并试图通过本课题期的调控紊乱，对这些机制的深入探讨似乎更能说组研究的经验和得失给开展类似研究工作的同行以明DTX有别于其他化疗药物的耐药成因。些许启迪。2肿瘤干细胞影响肺腺癌细胞耐药表型1建立肺腺癌DTX耐药细胞模型肿瘤干细胞理论认为，肿瘤是由异质细胞构成为了开展肺腺癌DTX耐药表型形成机制的研的一个群体，肿瘤的形成及生长由称为肿瘤干细胞究工作，本课题组首先采用体外逐步提高DTX浓度的一小群细胞驱动。干细胞是具有自我更新能力和的方法，诱导建立了稳定传代的人肺腺癌SPC

6、．A1多向分化潜能的一类未分化的细胞，由于其高表达耐DTX细胞系，命名为“SPC．A1／DTX”。与SPC．A1ATP结合盒(ATP—bindingcassette，ABC)转运蛋白，亲本细胞相比，SPC-A1／DTX细胞体积较大，呈不通常处于静止期，并具有较强的DNA修复能力及抗规则多边形，细胞融合前具有较多细长的伪足，提示凋亡能力，因而对传统化疗药物耐药J。肿瘤干细有较强的迁移能力。进一步研究表明，该耐药细胞胞由于高表达ABC转运蛋白，呈现天然耐药状态，对DTX呈现较高的耐药性(耐药指数达13．20)，同利用这一特性，可以从肿瘤细胞中

7、分选出一种富含时对紫杉醇、顺铂、卡铂、吉西他滨、长春瑞滨、表柔干细胞组分的侧群(sidepopulation，SP)细胞，成为比星、依托泊苷等多药耐药。与亲本细胞相比，SPC．研究干细胞特别是肿瘤干细胞的重要方法之一。A1／DTX耐药细胞倍增时间明显延长，s期细胞明在前期构建DTX耐药细胞系SPC—A1／DTX的显增多，对于DTX诱导的凋亡及G／M期检查点阻基础上，本课题组进一步比较了SPC．A1及SPC．A1／滞的应答能力明显降低。裸鼠皮下成瘤实验结果提DTX细胞间SP细胞比例的差异及其生物学特性，示，SPC—A1／DTX耐药细胞较亲本

8、细胞在体内的成以及ABC转运蛋白的表达及其对DTX耐药性的影瘤能力明显增强，产生的肿瘤对随后的DTX治疗敏响。结果发现，SPC—A1及SPC．A1／DTX细胞中均存感性明显降低。在SP细胞，S