多囊卵巢综合征促排卵治疗后子宫内膜hoxa10的表达

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1、多囊卵巢综合征促排卵治疗后子宫内膜HOXA10的表达：王玮，李晓冬，郝桂敏，徐素欣【摘要】目的:探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者经促排卵治疗后子宫内膜同源框基因A10（HOXA10）蛋白和基因水平表达的特点.方法:PCOS患者20例，月经周期规则的15例患者为对照组.PCOS患者用尿促性素小剂量递增法促排卵2～3周期，选取促排卵治疗成功而并未妊娠的PCOS患者12例，对照组15例，于月经来潮24h内诊刮子宫内膜，行HE染色观察子宫内膜形态学特点和免疫组织化学测定HOXA10蛋白的表达，并用RT

2、PCR方法检测子宫内膜HOXA10mRNA的表达.结果:免疫组织化学检测结果表明，PCOS组和对照组子宫内膜标本均可见HOXA10蛋白的表达，主要表达在腺上皮和间质细胞胞质内，而PCOS组子宫内膜HOXA10蛋白的表达弱于对照组.RTPCR检测显示PCOS组子宫内膜HOXA10mRNA表达强度低于对照组.结论:PCOS患者促排卵后子宫内膜HOXA10的低表达现象，可能与子宫内膜的功能受损有关.【关键词】同源框基因；多囊卵巢综合征；子宫内膜0引言同源框基因A10（HOXA10）［1］是细胞发育

3、的重要转录因子和控制胚胎发育的主控基因.成年期子宫内膜经历着活跃的周期性变化，这种周期性的组织破坏、再构建和重组的过程与胚胎发育过程的调控有某些相似之处，生育期的子宫内膜表达HOXA10基因［2］.HOXA10基因不仅调节子宫内膜细胞的增生与分化，同时还能影响相邻细胞间及远距离的信息传递，在正常月经周期和妊娠过程中诱导子宫内膜的正常分化和发育［3］.多囊卵巢综合征(PCOS)是最常见的妇科内分泌疾病，约占无排卵性不孕症的75％［4］，诱发排卵治疗是主要的治疗手段.近80％PCOS患者可获得排卵，

4、但妊娠率仅35％～40％［5］.我们观察PCOS患者经促排卵治疗后子宫内膜HOXA10基因的表达，以探讨PCOS患者子宫内膜容受缺陷与该基因的关系.1对象和方法1.1对象200506/200610因不孕而就诊于河北医科大学第二医院生殖医学科的PCOS患者20例为PCOS组，年龄［31.6±3.0（23～37）］岁.以同期月经周期规则、因输卵管因素或其他因素就诊的15例患者为对照组，年龄［30.6±3.3（25～38）］岁.对PCOS患者用尿促性素小剂量递增法促排卵2～3周期.所有促排卵的PC

5、OS患者及对照组均经B超监测，待卵泡成熟后，指导性交或行人工授精.PCOS的诊断标准：按照2003年鹿特丹修正的诊断标准［6］以下3项中符合2项：排卵稀发或无排卵；高雄激素血症的临床和/或生化体征；多囊卵巢.排除其他病因（先天性肾上腺皮质增生、分泌雄激素的肿瘤和库欣综合征）.标本：选取PCOS促排卵治疗成功而并未妊娠的患者12例，对照组15例，均经征得患者同意，于月经来潮24h内行诊断性刮宫.刮取的子宫内膜组织用100mL/L多聚甲醛固定，行HE染色和免疫组织化学测定，其中未妊娠的PCOS患者和

6、对照组均选取8例分泌期的子宫内膜标本立即放入液氮中用于mRNA的提取.主要试剂:HOXA10羊抗多克隆抗体浓缩液(sc7938)，效价1∶50（SANTACRUZ公司）；ElivisionTMPlus免疫组化试剂盒、DAB显色剂（福州迈新生物技术开发有限公司）；βactin抗体（SantaCruz公司）；HOXA10引物由北京赛百盛公司合成.1.2方法1.2.1光镜观察取各组子宫内膜标本，常规制备4μm连续石蜡切片8张，HE染色后于光镜下进行观察.1.2.2免疫组织化学染色检测取子宫内膜切片

7、行常规脱蜡至水、3mL/L双氧水孵育15min，PBS冲洗，滴加一抗，4℃过夜.用PBS代替一抗作为阴性对照，PBS冲洗，滴加Postblocking聚合物增强剂（试剂A），室温孵育30min.PBS冲洗，滴加polyHRPantimouseIgG酶标抗鼠聚合物（试剂B），室温孵育30min.PBS冲洗，DAB显色剂显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，中性树胶封片，光学显微镜下观察照相.HOXA10免疫组化染色以细胞质黄色为阳性信号.所有图像信息采用捷达801图像分析系统，对所有切片中阳性区域

8、的单位光密度值（Density）进行定量测定和分析.由2名有经验的病理科医师采用双盲法评估算分.对少数不易判断的切片重新共同阅片而定.1.2.3RTPCR方法测定Trizol法提取子宫内膜组织中总RNA.逆转录反应体系15μL，包括细胞组织总RNA4μL，0.5g/L随机引物1μL，5×107u/LRNasin0.5μL，5×MMLV逆转录反应缓冲液(250mmol/LTrisHCl，pH8.3，250mmol/LKCl，50mmol/LMgCl2，50mmol/LDTT，2.5mmol/