多囊卵巢综合征促排卵治疗后子宫内膜hoxa10的表达的论文

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1、多囊卵巢综合征促排卵治疗后子宫内膜HOXA10的表达的论文作者：王玮，李晓冬，郝桂敏，徐素欣【摘要】目的:探讨多囊卵巢综合征（pcos）患者经促排卵治疗后子宫内膜同源框基因a10（hoxa10）蛋白和基因水平表达的特点.方法:pcos患者20例，月经周期规则的15例患者为对照组.pcos患者用尿促性素小剂量递增法促排卵2～3周期，选取促排卵治疗成功而并未妊娠的pcos患者12例，对照组15例，于月经来潮24h内诊刮子宫内膜，行he染色观察子宫内膜形态学特点和免疫组织化学测定hoxa10蛋白的表达，并用r

2、tpcr方法检测子宫内膜hoxa10mrna的表达.结果:免疫组织化学检测结果表明，pcos组和对照组子宫内膜标本均可见hoxa10蛋白的表达，主要表达在腺上皮和间质细胞胞质内，而pcos组子宫内膜hoxa10蛋白的表达弱于对照组.rtpcr检测显示pcos组子宫内膜hoxa10mrna表达强度低于对照组.结论:pcos患者促排卵后子宫内膜hoxa10的低表达现象，可能与子宫内膜的功能受损有关.【关键词】同源框基因；多囊卵巢综合征；子宫内膜0引言同源框基因a10（hoxa10）［1］是细胞发育的重要

3、转录因子和控制胚胎发育的主控基因.成年期子宫内膜经历着活跃的周期性变化，这种周期性的组织破坏、再构建和重组的过程与胚胎发育过程的调控有某些相似之处，生育期的子宫内膜表达hoxa10基因［2］.hoxa10基因不仅调节子宫内膜细胞的增生与分化，同时还能影响相邻细胞间及远距离的信息传递，在正常月经周期和妊娠过程中诱导子宫内膜的正常分化和发育［3］.多囊卵巢综合征(pcos)是最常见的妇科内分泌疾病，约占无排卵性不孕症的75％［4］，诱发排卵治疗是主要的治疗手段.近80％pcos患者可获得排卵，但妊娠率仅35

4、％～40％［5］.我们观察pcos患者经促排卵治疗后子宫内膜hoxa10基因的表达，以探讨pcos患者子宫内膜容受缺陷与该基因的关系.1对象和方法1.1对象200506/200610因不孕而就诊于河北医科大学第二医院生殖医学科的pcos患者20例为pcos组，年龄［31.6±3.0（23～37）］岁.以同期月经周期规则、因输卵管因素或其他因素就诊的15例患者为对照组，年龄［30.6±3.3（25～38）］岁.对pcos患者用尿促性素小剂量递增法促排卵2～3周期.所有促排卵的pcos患者及对照组均经b

5、超监测，待卵泡成熟后，指导性交或行人工授精.pcos的诊断标准：按照2003年鹿特丹修正的诊断标准［6］以下3项中符合2项：排卵稀发或无排卵；高雄激素血症的临床和/或生化体征；多囊卵巢.排除其他病因（先天性肾上腺皮质增生、分泌雄激素的肿瘤和库欣综合征）.标本来源：选取pcos促排卵治疗成功而并未妊娠的患者12例，对照组15例，均经征得患者同意，于月经来潮24h内行诊断性刮宫.刮取的子宫内膜组织用100ml/l多聚甲醛固定，行he染色和免疫组织化学测定，其中未妊娠的pcos患者和对照组均选取8例分泌期的子

6、宫内膜标本立即放入液氮中用于mrna的提取.主要试剂:hoxa10羊抗多克隆抗体浓缩液(sc7938)，效价1∶50（santacruz公司）；elivisiontmplus免疫组化试剂盒、dab显色剂（福州迈新生物技术开发有限公司）；βactin抗体（santacruz公司）；hoxa10引物由北京赛百盛公司合成.1.2方法1.2.1光镜观察取各组子宫内膜标本，常规制备4μm连续石蜡切片8张，he染色后于光镜下进行观察.1.2.2免疫组织化学染色检测取子宫内膜切片行常规脱蜡至水、3ml/l双氧水孵

7、育15min，pbs冲洗，滴加一抗，4℃过夜.用pbs代替一抗作为阴性对照，pbs冲洗，滴加postblocking聚合物增强剂（试剂a），室温孵育30min.pbs冲洗，滴加polyhrpantimouseigg酶标抗鼠聚合物（试剂b），室温孵育30min.pbs冲洗，dab显色剂显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，中性树胶封片，光学显微镜下观察照相.hoxa10免疫组化染色以细胞质黄色为阳性信号.所有图像信息采用捷达801图像分析系统，对所有切片中阳性区域的单位光密度值（density）进行定量测

8、定和分析.由2名有经验的病理科医师采用双盲法评估算分.对少数不易判断的切片重新共同阅片而定.1.2.3rtpcr方法测定trizol法提取子宫内膜组织中总rna.逆转录反应体系15μl，包括细胞组织总rna4μl，0.5g/l随机引物1μl，5×107u/lrnasin0.5μl，5×mmlv逆转录反应缓冲液(250mmol/ltrishcl，ph8.3，250mmol/lkcl，50mmol/lmgcl2，50mmol/ldtt，2