多囊卵巢综合征促排卵治疗后子宫内膜hoxa10的表达.doc

《多囊卵巢综合征促排卵治疗后子宫内膜hoxa10的表达.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、多囊卵巢综合征促排卵治疗后子宫内膜H0XA10的表达作者：王玮，李晓冬，郝桂敏，徐素欣【摘要】目的：探讨多囊卵巢综合征患者经促排卵治疗后子宫内膜同源框基因A10蛋白和基因水平表迗的特点.方法:PCOS患者20例，月经周期规则的15例患者为对照组.P⑶S患者用尿促性素小剂量递增法促排卵2〜3周期，选取促排卵治疗成功而并未妊娠的PC0S患者12例，对照组15例，于月经来潮24h内诊刮子宫内膜，行HE染色观察子宫内膜形态学特点和免疫组织化学测定H0XA10蛋白的表迗，并用RTPCR方法检测子宫内膜HOXAlOmRNA的表达.结果:免疫组织化学检测结果表明，PCOS组和

2、对照组子宫内膜标本均可见H0XA10蛋白的表达，主要表迗在腺上皮和间质细胞胞质内，而PCOS组子宫内膜HOXA10蛋白的表达弱于对照组.RTPCR检测显示PCOS组子宫内膜HOXAlOmRNA表迗强度低于对照组.结论:PCOS患者促排卵后子宫内膜H0XA10的低表达现象，可能与子宫内膜的功能受损有关.【关键词】同源框基因；多囊卵巢综合征；子宫内膜0引言同源框基因A10[1]是细胞发育的重要转录因子和控制胚胎发育的主控基因.成年期子宫内膜经历着活跃的周期性变化，这种周期性的组织破坏、再构建和重组的过程与胚胎发育过程的调控有某些相似之处，生育期的子宫内膜表迗HOXA

3、10基因［2］.HOXA10基因不仅调节子宫内膜细胞的增生与分化，同时还能影响相邻细胞间及远距离的信息传递，在正常月经周期和妊娠过程中诱导子宫内膜的正常分化和发育［3］.多囊卵巢综合征(PCOS)是最常见的妇科内分泌疾病，约占无排卵性不孕症的75°/。［4］，诱发排卵治疗是主要的治疗手段.近80°/oPC0S患者可获得排卵，但妊娠率仅35%〜40%［5］.我们观察PCOS患者经促排卵治疗后子宫内膜H0XA10基因的表达，以探讨PCOS患者子宫内膜容受缺陷与该基因的关系.1对象和方法对象XX06/XX10因不孕而就诊于河北医科大学第二医院生殖医学科的PCOS患者2

4、0例为PCOS组，年龄［土］岁.以同期月经周期规则、因输卵管因素或其他因素就诊的15例患者为对照组，年龄［士］岁.对PCOS患者用尿促性素小剂量递增法促排卵2〜3周期.所有促排卵的PCOS患者及对照组均经B超监测，待卵泡成熟后，指导性交或行人工授精.PCOS的诊断标准：按照年鹿特丹修正的诊断标准［6］以下3项中符合2项：排卵稀发或无排卵；高雄激素血症的临床和/或生化体征；多囊卵巢.排除其他病因.标本来源：选取PCOS促排卵治疗成功而并未妊娠的患者12例，对照组15例，均经征得患者同意，于月经来潮24h内行诊断性刮宫.刮取的子宫内膜组织用100mL/L多聚甲醛固定

5、，行HE染色和免疫组织化学测定，其中未妊娠的PCOS患者和对照组均选取8例分泌期的子宫内膜标本立即放入液氮中用于mRNA的提取.主要试剂:HOXA1O羊抗多克隆抗体浓缩液(sc7938)，效价1:50;ElivisionTMPlus免疫组化试剂盒、DAB显色剂；0actin抗体；H0XA10引物由北京赛百盛公司合成.方法光镜观察取各组子宫内膜标本，常规制备4um连续石蜡切片8张，HE染色后于光镜下进行观察.免疫组织化学染色检测取子宫内膜切片行常规脱蜡至水、3mL/L双氧水孵育15min，PBS冲洗，滴加一抗，4°C过夜.用PBS代替一抗作为阴性对照，PBS冲洗，

6、滴加Postblocking聚合物增强剂，室温孵育30min.PBS冲洗，滴加polyHRPantimouselgG酶标抗鼠聚合物，室温孵育30min.PBS冲洗，DAB显色剂显色，苏木素复染，梯度乙醇脱水，中性树胶封片，光学显微镜下观察照相.H0XA10免疫组化染色以细胞质黄色为阳性信号.所有图像信息采用捷达801图像分析系统，对所有切片中阳性区域的单位光密度值进行定量测定和分析.由2名有经验的病理科医师采用双盲法评估算分.对少数不易判断的切片重新共同阅片而定.PCR方法测定Trizol法提取子宫内膜组织中总RNA.逆转录反应体系15nL,包括细胞组织总RNA

7、4pL，g/L随机引物luL，5X107u/LRNasinuL,5XMMLV逆转录反应缓冲液(250mmol/LTrisHC1，pH,25Ommol/LKCl,50mmol/LMgC12，50mmol/LDTT，mmol/LSpermidin)3uL，lOmmol/LdNTPyL，25mmol/LMgC12uL,1mL/LDEPC水yL，(2X108u/L)MMLV逆转录酶1uL.37°C60min，95°C5min灭活MMLV逆转录酶，立即置冰浴中1〜2min，5000r/min离心lmin后，置-30°C保存.从NCBINucleotide数据库中查找目的基

8、因原始cDNA序列，采用