二甲双胍治疗后多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜hoxa10的表达及意义论文

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1、二甲双胍治疗后多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜Hoxa10的表达及意义论文李晓冬马毓梅张杰英王玮郝桂敏蔡建辉【关键词】胰岛素；多囊卵巢综合征；子宫内膜【Abstract】AIM:TostudytheproteinexpressionsofHoxa10,insulin(INS)andinsulinreceptor(INSR)intheendometriumofpolycysticovariansyndrome(PCOS)ratbeforeandaftertherapyetformin.METHODS:FiftyfourfemaleSDratsaged85d

2、odelgroup(n=17)andmetformintreatmentgroup(n=17)randomly.Theratsinthelatter2groupsethodforPCOSmodeling,folloinistrationofplaceboormetforminrespectively.After14dtreatment,theratsetriumtestosteroneandinsulinetriumofPCOSgroupbutthatofINSetformintreatmentgroup,Hoxa10expressiontesto

3、steroneandinsulindeclinedaftermetformintreatment(P0.01,P=0.048).CONCLUSION:INSresistanceanddecreasedendometrialreceptivitymayexistintheendometriumofPCOSrats,etformin.【Keye;endometrium【摘要】目的:探讨二甲双胍治疗前后多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠子宫内膜组织中Hoxa10及胰岛素（INS）、INS受体（INSR）蛋白表达的变化.方法:选取85日龄SD雌性大鼠54只，随

4、机分为：①对照组（20只）；②PCOS组（17只）；③二甲双胍治疗组（17只）.后两组先参照PoretskyL等方法复制PCOS大鼠模型，造模成功后，PCOS组喂服安慰剂，治疗组喂服二甲双胍,14d后断头处死各组大鼠并取材.采用免疫组织化学ElivisionTMPlus两步法检测三组子宫内膜Hoxa10及INS，INSR蛋白的表达.并取外周血测定INS和睾酮含量.结果:PCOS组大鼠子宫内膜Hoxa10和INSR表达下降(P0.01,.freelarkers公司，MS1378），鼠抗mAb，效价1∶50；INSR（Neomarkers公司，MS63

5、6），鼠抗mAb，效价1∶50；ElivisionTMPlus免疫组化试剂盒（福州迈新试剂公司）；血睾酮和INS试剂盒（Beckmancoulter公司）.1.2方法1.2.1动物模型制备与分组将大鼠随机分为对照组（20只），PCOS组（17只）和二甲双胍治疗组（17只）.对照组大鼠经皮下给予注射用水1mL，2次/d.后两组参照Poretsky等［2］的方法，经皮下注射绒毛膜促性腺激素3.0U及INS6U，2次/d，22d后检测阴道涂片和血激素水平符合PCOS模型，给动物分别喂服安慰剂和二甲双胍（按人与大鼠的公斤体质量折算系数计算剂量），1次/d，

6、14d后断头处死各组大鼠，取躯干血，分离血清，测定血清INS和睾酮水平.打开腹腔，观察双侧卵巢和子宫的大体形态并以100mL/L多聚甲醛固定,石蜡包埋.1.2.2光镜下形态学观察取卵巢及子宫石蜡包埋组织，4μｍ连续切片8张，常规HE染色光镜观察.1.2.3免疫组化检测子宫内膜Hoxa10及INS，INSR的表达取子宫切片，常规脱蜡至水、ElivisionTMPlus两步法，DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片，光镜观察.INSR需抗原修复.Hoxa10，INS和INSR阳性信号分别为细胞质、细胞质、细胞膜呈棕黄色颗粒.对腺上皮细胞和间质细胞分别计分

7、.免疫组化半定量方法参考Mccarthy方法按染色强度（i）分为弱(淡黄)、中(黄)、强(棕黄)三等，并分别记为1，2，3分.观察切片，计算各染色强度的细胞所占百分比（Pi）.每张染色片的蛋白表达评分（H）=∑(i±1)×Pi.H值范围为0～4；0分为所有细胞均无染色，4分为所有细胞均为强染色，0～4之间为不同程度的蛋白表达水平.H1为阴性.所有切片均由2名有经验的病理科医师采用双盲法评估算分.对少数不易判断的切片重新共同阅片而定.1.2.4激素测定Access免疫分析系统定量检测血清INS和睾酮水平.统计学处理:所有数据均以x±s表示，采用SAS

8、6.12统计软件进行数据统计分析.多组间比较采用单因素方差分析（oneeandpolycysticovarysyndrom