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《浅谈六味地黄丸对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、浅谈六味地黄丸对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响论文摘要:目的探讨六味地黄丸对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响。方法原代培养大鼠前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测六味地黄丸含药血清对前脂肪细胞的增殖情况,以酶组织化学法检测其对前脂肪细胞分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响,油红O染色方法测定其对细胞内脂肪积聚的影响。结果10%以内六味地黄丸含药血清对大鼠前脂肪细胞的增殖有促进作用,对分化过程中的GPDH升高有抑制作用,而对于分化过程中的脂肪积聚则有促进分解的作用。结论六味地黄丸能促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制大鼠前脂肪
2、细胞的分化。关键词:六味地黄丸；大鼠；前脂肪细胞；细胞增殖；细胞分化 Abstract：ObjectiveToinvestigatetheinfluenceofLiuonproliferationofratpreadipocytesethod,theinfluenceofLiuonexpressionofGPDHinedbyenzymetissuechemicalmethod,theeffectonlipidaccumulationinedbyOilRedOstaining.ResultsLiustimulatedratpreadi
3、pocyteproliferation,inhibitedGPDHup-regulationduringdifferentiation,inhibitedlipidaccumulationincelldifferentiationulatedratpreadipocyteproliferation,inhibitedratpreadipocytedifferentiation. Keya公司；MTT(批号1313Bl1)购自Amresco公司；标准胎牛血清(批号20050617)购自兰州民海生物工程有限公司；油红0(批号830120
4、)购自北京夏新试剂分装厂。DMSO购自宜兴市化工厂；水为双蒸水；其余试剂均为分析纯。 1.2动物健康EM/低糖培养液5～10mL,塞紧瓶塞,将底面翻转朝上。37℃、5%C02培养1～2h,待粘附牢固后,翻转培养瓶做正常培养,每日观察。原代培养区域单层汇合达到约1/2瓶底面积后即可传代,取培养7代以内的大鼠前脂肪细胞用于实验。2.4大鼠前脂肪细胞生长曲线按文献[3]方法测定,从生长曲线可见前脂肪细胞的倍增时间约为60h。 2.5酶组织化学提取法测定大鼠前脂肪细胞分化过程中的标志物――甘油磷酸脱氢酶(GPDH)动态变化 根据文献[4
5、]的方法进行测定。结果传代细胞形成单层汇合后,在胰岛素10μmol/L和地塞米松1μmol/L的作用下即开始上升并迅速增加,10d左右到达高峰并维持在高水平。形态上表现为单层汇合1周后,细胞内出现大量脂滴。 2.6油红O染色提取法测定脂肪细胞内脂肪含量 用PBS冲洗2～3次,加入10%的甲醛缓冲液室温下固定1h,去固定液,加入油红O染色,室温下染色2h,去染色剂,以无菌双蒸水冲洗2次,洗去未着色的染料,倒置显微镜下观察,照相。结束后,以异丙醇溶解,490nm酶标仪下测吸光度,以吸光度(A值)表示,画出时间-A值曲线。结果前脂肪细胞
6、内的脂肪含量在单层形成6～7d后迅速增加,11d左右到达高峰,与形态学上的单层汇合后1周左右细胞内出现脂肪颗粒完全吻合。细胞内脂肪含量的增加比GPDH的出现要晚6d左右,说明酶的出现在先,脂肪出现在后。 2.7分组及给药 将第4代的大鼠前脂肪细胞接种到96孔板,贴壁后于96孔培养板每6孔一组,分为4组：10%空白大鼠血清组,六味地黄丸药物血清高、中、低剂量组(浓度分别为10%、5%、2.5%,简称高、中、低剂量组)。上述各组所含血清的终浓度均为10%,血清含量不足者以空白大鼠血清补齐。 2.8六味地黄丸对大鼠前脂肪细胞增殖的影响
7、 配制大鼠前脂肪细胞增殖培养液：DMEM/低糖＋空白大鼠血清,分别与六味地黄丸含药血清共同溶解于培养液中,其终浓度同“2.7”项。取第4代的大鼠前脂肪细胞,以10000个/孔接入96孔培养板中,37℃、5%C02培养12h。分别加入上述配制的各种含药培养液,再培养48h。将浓度为5g/LMTT液与10%空白大鼠血清的DMEM培养液按体积(1∶9)配成MTT培养液。移出培养液,换上MTT培养液培养4h,吸干培养液,每孔加100μLDMSO,混匀后置酶标仪490nm观测吸光度值,观察各浓度含药血清对前脂肪细胞增殖的影响,测定各孔吸光度(
8、A值)。6复孔取平均值。实验数据以x±s表示,进行t检验。结果见表1。 2.9六味地黄丸对大鼠前脂肪细胞分化过程中甘油磷酸脱氢酶的影响 配制大鼠前脂肪细胞分化培养液：DMEM/低糖＋空白大鼠血清＋胰岛素10μmol/
