pid1对猪肌内前体脂肪细胞增殖和分化的影响

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1、学号Ｓ２０誦５Ａ巧与Ｓ８—１１．３四川巧化大学碱：±：学位论文ＰＩＤ１对猜肌內前化脂肋细胞增殖和分化的影响王欢ｒｆ？，＊－？指导教师陈小巧副教授―一学科专业动物营养与饲料科学研巧方向猪的营养２０１５年５月？？＊戸，－１屯．Ｖ，ＳｉｃｈｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙＭａｓｔｅｒＤｅｇｒｅｅＴｈｅｓｉｓＥｆｆｅｃｔｏｆＰｈｏｓｈｏｔｒｏｓｉｎｅＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎＤｏｍａｉｎｐｙＣｏｎｔａｉｎｉｎ１ｏｎＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄＤ

2、ｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｇｏｆＰｏｒｃｉｎｅＩｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒＰｒｅａｄｉｏｃｔｅｐｙＷａｎＨｕａｎｇＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：ＣｈｅｎＸｉａｏｌｉｎｇ（ＡｓｓｏｃｉａｔｅＰｒｏｆｅｓｓｏｒ）ｐＳｕｂｅｃｔ：ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎａｎｄＦｅｅｄＳｉｃｅｎｃｅｊＲｅｓｅｒｃｈＤｉｒｅｃｔｉｏｎ：ＳｗｉｎｅＮｕｔｒｉｔｉｏｎＭａ２０１５ｙ，本研究由国家自然科学基金（编号：３１２０１８１１）资助ＴｈｅｗｏｒｋｗａｓｓｕｏｒｔｅｄｂｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｐｐ

3、ｙＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａＮｏ．３１２０１８１１（）论文独卸性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研巧工作所取得的成果，学位论文中不包含其他个。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机一构的学位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。，研巧生签名：至巧备年月ｆ日关于论文使用授巧的声明：本人完全了解四川农业大学有关保留，学校有权保留并向国家有、使用学位论文的规定即、关部口或

4、机构送交论文的复印件巧电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。□本论文不保密。□本论文保密，在＿＿年解密后适用本授权。＂＂（请在Ｗ上□内划Ｖ），研究生签名：＾年备月ｆ日＾？毛］导师签名：Ｍ年《月日中文摘要碟酸酪氨酸互作结构域１（Ｐｈｏｓｐｈｏｔｙｒｏｓｉｎｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１，ｆ／Ｄｌ）一是个近期发现的在化胖者腹膜后脂肪组织中高表达的基因，后续研巧发现该基因参。与膜岛素抵抗，并

5、且可能与脂质代谢有关相关性分析发现，不同化内脂肪含量的猪＞／仍１表达量与肌巧脂肪的沉积呈显著正相关，戶孤１可能是影响肌内脂肪沉积。因此的候选基因。本研究猪肌内前体脂肪细胞为研究对象，探巧户瓜１基因对猪肌内前体脂肪细胞増殖和分化的影响，主要研究内容及结果如下；１．巧Ｐ妇＞１基因原巧表达、纯化Ｖ多克隆抗体制备及组织表达巧分祈从ｐＥＴ２８ａ（＋）为载体，大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３巧宿主菌表达猪Ｐ狂）１基因ＣＤＳ区和－ＰＡＧＥ显示表达３２ｋＤａ组氨酸标签融合的重组蛋白。ＳＤＳ巧的蛋白分子量约，经过表°达条件的优化，重沮蛋白能够在３０Ｃ、经０．１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ

6、诱导４ｈ得到高效表达，表泣量达到宿主菌总蛋白的如％。溶解性分析表明重组蛋白主要Ｗ包涵体形式存在。包涵体使用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸脈溶解后，使用亲和层析法进行纯化，最终重组蛋白浓度达一－到了１．６ｍｇ／ｍＬ，并且ＳＤＳＰＡＧＥ检测可见单条带。对纯化后的蛋白进行质谱鉴定，结果表明纯化的重组蛋白为猪Ｐ瓜１蛋白。重组蛋白经稀释法复性后处理增殖中的３Ｔ３－Ｌ３Ｔ３－Ｌ１前体脂肪１前体脂肪巧胞，发现该蛋白能促进细胞増殖，表明复性后的蛋白具有生物学活性。另外，本研究用纯化后的蛋白多次免疫ＳＤ大鼠的方法制备多克隆抗体。多克隆抗体的效价和特异性分别用间接酶联免疫反应和Ｗｅｓｔ

7、ｅｒｎＢｌｏｔ鉴巧。ＥＬＩＳＡ结果表明，制备的多克隆抗体滴度达１：２０４８０；ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示该多克隆抗体能够特异性识一＞别ＰＩＤ１蛋白，这将为研究戶化，表明多克隆抗体制备成功１的功能提供个很好的王具。１０．周龄ＤＬＹ猪为研究对象，使用自制的多克隆抗体检测了户／０１基因在腰大、ＰＩＤ１肌、趾长伸肌、脂肪、背最长肌、肾、肺、脾、肝脏和屯脏中的表达情况，发现。蛋白主要表达于肌肉组织，其次是肝脏