黑毛和牛肌内前体脂肪细胞分化的基因表达与肌内脂肪性能的关联性研究

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1、新允客晨林水彦政策它推造于否实用技衍阴凳事棠ResearchandDevelopmentProjectsforApplicationinPromotingNewPolicyofAgriculture，ForestryandFisheries遣佞子凳现胡简l：上否和牛肉。不饱和度向上技衍。阴凳陈香凝：黑毛和牛肌内前体脂肪细胞分化的基因表达与肌内脂肪性能的关联性研究黑毛和牛肌内前体脂肪细胞分化的基因表达与肌竺登竺关联性研究㈣剃研究生：陈香凝。一⋯导师：李碧春教授麻生久教授专业：动物遗传育种与繁殖(扬州大学动物科学与

2、技术学院，扬州225009)摘要肉不饱和度(Unsaturatedfattyacids／Saturatedfattyacids，us／s)的相关性，筛选影响日本黑毛1．牛肌内前体脂肪(Bovineintramuscularpreadipocyte，BⅢ)细胞的分离、培养及鉴定扬州大学硕士学位论文地塞米松和10mM乙酸钠的成脂诱导培养基定向诱导BIP细胞向成熟脂肪细胞分化，收集诱导0、2、4、6、8d细胞，提取细胞总RNA，采用实时荧光定量PCR方法检测细胞分化过程中成脂基因的表达。结果显示，转录因子PPAR吖和

3、C／EBP．6在诱导2d明显大幅上调，其中，PPAR吖于2d达到表达高峰，4d明显回落，随后维持稳定略有升高趋势；C／EBP．6表达于4d达到最高水平，6d显著下调，之后稳定略有升高。然而，SREBP．1表达水平呈一种基本稳定略有下降趋势，正常培养和成脂诱导培养的细胞内SREBP．1表达无显著差异。脂肪合成相关酶基因FASN和SCD表达水平随诱导培养呈”上升．下降．上升”趋势，于8d出现最高表达。脂肪酸转运相关基因aP2和CD36表达水平在分化前中期相似，即在诱导2d迅速表达，达到表达峰值，4d明显下调：在分化

4、中后期，aP2表达逐渐升高，8d达到最高水平，而CD36维持稳定略有升高趋势。脂肪酸转运基因之一的FATPl处于相对稳定略有下调状态。本实验结果表明，在分化早期以转录因子的转录激活为主，而中后期脂肪酸合成和跨膜转运更活跃。此外，上述基因的表达模式可能存在种属差异和细胞系差异。3．BIP细胞分化过程中成脂基因的表达水平与IMF性能的相关性分析选取源于日本东北部4个区域的47头日本黑毛和牛，分别饲喂正常饲料和添加膨软米的饲料，于肥育期(22月龄)采集血液样本，制备血浆，用于配制47个诱导培养基。复苏所得的冻存BIP

5、细胞，传代2．3次，利用含2．5％肥育牛血浆和7．5％胎牛血清(Fetalbovineserum，FBS)的成脂诱导培养基，分别定向诱导BIP细胞向成熟脂肪细胞分化，收集诱导8d细胞，提取细胞总RNA，采用实时荧光定量PCR方法检测细胞分化过程中成脂基因的表达。屠宰达到上市期(27．31月龄)的47头实验用牛，采集最长肌，按照日本牛肉质量分级标准评定BMS，同时检测肌内脂肪酸组成，分析与诱导后BIP细胞内成脂基因的相关性。结果表明：屠宰时BMS分别与aP2(R=0．469)、SREBP．1(R=0．389)和P

6、PARo'f(R=0．533)的表达水平之间存在正相关，差异极显著(氏0．01)。屠宰时最长肌的US／S与SREBP．1表达量(R=0．398)呈现正相关，差异极显著(尸<0．01)。基于肥育牛血浆来源进一步分析，使用饲喂正常饲料的牛血浆，BMS与PPAR-'f表达(R=O．428)呈明显正相关(．P

7、P<0．05)和PPAR-y(R=0．621，P<0．01)表达呈正相关，最长肌的US／S与4个基因表达量之间未见相关性。这说明PPAR-丫在标记肌内脂肪含量方面更为可靠，SREBP．1在指示脂肪酸成分方面具有较高的稳定性。关键词：黑毛和牛；牛肌内前体脂肪细胞；成脂分化；肌内脂肪；相关性陈香凝：黑毛和牛肌内前体脂肪细胞分化的基因表达与肌内脂肪性能的关联性研究StudyonAdipogenesis·-relatedGeneExpressionProfilesofIntramuscularPreadipocytef

8、romJapaneseBlackCattleandCorrelationwithIntramuscularFatM．S．Candidate：XiangningChenAdvisor：Prof．BichunLiProf．HisashiAsoMajor：AnimalGenetics，BreedingandReproduction(CollegeofAnimalScienceandTechn