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《表达谱基因芯片筛选前体脂肪细胞分化相关基因的研究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、表达谱基因芯片筛选前体脂肪细胞分化相关基因的研究【摘要】目的:运用基因芯片技术研究前体脂肪细胞分化相关基因表达谱的变化。方法:体外培养前体脂肪细胞（3T3-L1），诱导分化为成熟脂肪细胞。提取脂肪细胞总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,应用含有45038种小鼠基因cDNA的表达谱芯片Mouse430_2进行差异表达谱分析。结果:在前体脂肪细胞分化的基因表达谱中差异表达基因共有640条,其中表达水平显著变化的有38条（表达水平改变5倍以上），上调基因24条,下调基因14条。差异表达基因中有细胞凋亡相关基因、原癌基因和抑癌基因、细胞信号和传递蛋白基因等多种基因。
2、这些基因可能与脂肪细胞分化相关疾病的发病机制有关。结论:采用基因芯片技术筛选脂肪细胞分化相关基因,可能为脂肪细胞分化相关疾病病因和发病机制的研究提供新思路。【关键词】前体脂肪细胞；基因表达；基因芯片[Abstract]Objective:Toscreenthedifferentlyexpressedgenesduringcelldifferentiatedofadipocyte3T3-L1usingcDNAmicroarray.Methods:3T3-L1cellswerecultured,inducethemdifferentiated,isolatetotalR
3、NA.ReverselytranscriptedtocDNAswithfluorescentdUTPtopreparethetargetsequences,thenthetargetsequenceswerehybridizedtocDNAmicroarrayof45038humangenes.Afterwashing,thecDNAmicroarraywerescannedforthefluorescentsignalsandshoweddifferencesbetween2kindsofcells.Results:Among45038geneprobes,the
4、expressionlevelof640geneschanged,38genesshoweddramaticallydifferentialexpressedprofilewith24upregulatedand14downregulatedgenes.Thedifferentialexpressedgeneswererelatedwithapoptosis,protoorantioncogene,cellsignalconduct,andytoskeleton,etc.Thesegenesmightberelatedwiththepathogenesisofadi
5、pocytedifferentiation.Conclusion:TheinvestigationsbasedoncDNAmicroarraycansequencerelatedgenesinadipocytedifferentiation,andmayprovideanewideainstudyingpathogenesisofadipocytedifferentiation.[Keywords]3T3-L1cell;Geneexpression;cDNAmicroarray脂肪组织不仅是被动的能量储存器官，而且是能够分泌多种激素类物质的内分泌器官；人类多种疾病与
6、脂肪细胞分化及其调控失常有关，包括肥胖症、脂肪肝、高脂血症、糖尿病及乳腺癌等疾病[1]。研究脂肪细胞分化机制及其调控，不仅对研究上述生理和疾病过程机制有重要理论意义，而且对其预防与治疗也具有实际意义。为此,我们应用基因芯片技术研究3T3-L1细胞分化前后基因表达谱的改变,全面了解3T3-L1细胞分化所伴发的基因差异表达,研究3T33-L1细胞分化的产生机制并为寻找相应的干预手段提供理论基础。1材料与方法1.1材料3T3-L1细胞由本实验室保存，DMEM培养基、胎牛血清(fetalbovineserum，FBS)、胰蛋白酶和TRIzol由美国Invitrogen公司提
7、供，胰岛素、地塞米松、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MIX)和油红O(oilred-O)染料由美国Sigma公司提供，One-CyclecDNASynthesisKit、IVTLabellingKit、Hybridization,washandstainKit、Mouse430_2基因芯片由美国AFFYMETRIX公司提供。1.2方法1.2.13T3-L1前体脂肪细胞培养和诱导分化用完全培养液(DMEM+10%FBS+100U/ml青、链霉素)，在37℃孵箱(5%CO2，95%空气)中培养细胞，每2天换液1次。待细胞生长至完全融合后2天(第0天)，开始诱导分化。收
