利用基因芯片研究gankyrin表达抑制对结肠sw480细胞基因表达谱的影响

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1、中国人民解放军军事医学科学院硕士学位论文利用基因芯片研究Gankyrin表达抑制对结肠SW480细胞基因表达谱的影响姓名：马骞申请学位级别：硕士专业：细胞生物学指导教师：周涛201006摘要摘要Gankyrin(PSMDlO)是近年来新发现的一个癌蛋白，由226个氨基酸组成，内含七个ankyrin重复序列，在结构上高度保守。GaIll(yrin是26S泛素蛋白酶体的调解亚单位，能够特异地结合19S调节子的S6bATPase。最初发现GankyriIl在多种肝癌细胞中高表达。初步研究表明Ganky血在细胞内发挥多种功能，能够

2、与I也发生相互作用，在体内和体外促进RB的泛素化降解；能够增强Mdm2的泛素E3酶活性进而促进Mdm2对P53的降解；能够与Cdk4结合，在细胞周期调控中发挥重要作用，拮抗p161NK4A和p181NK4C2的抑癌功能；还能与RelA发生相互作用，抑制NF一1国通路的活性。此外，在Ras转化的NIH3T3细胞中Gankyrin被显著上调，提示Ganky血可能参与了Ras诱导的细胞转化过程。上述研究提示Gankyrin参与了肿瘤细胞内多种信号通路。但目前国内外对GaIlk蜘n功能的研究并不深入，GaIlk徊n在细胞生长、代谢

3、、凋亡等生理过程中，尤其是在肿瘤细胞增殖、浸润、迁移过程中发挥的功能尚不清楚。为了探明Gankyrin在肿瘤的发生、发展、转移过程中的功能，寻找肿瘤细胞中Gank如n参与的信号通路，本研究尝试利用高通量基因表达谱芯片技术，分析Gankyrin稳定干涉后SW480人结肠癌细胞中基因表达的变化，筛选出显著变化的基因，为深入研究Qu墩河n的功能奠定基础。本研究首先制备细胞样品，完成芯片杂交实验。随后应用多种数据分析方法，对芯片结果进行分析，筛选出78种显著变化的基因，并通过RT．PCR和Real—timePCR验证了其中部分基因

4、，证实了芯片结果的可靠性。进一步对芯片结果进行了patIlway分析，分析了Ganky血发挥功能参与的信号通路。结果表明Gank河n广泛参与了细胞内的多种生理／病理活动，特别是对肿瘤细胞增殖、迁移、侵润等多种通路都具有潜在的调节作用。研究结果为深入探索Gankyrin的功能机制，尤其是Gallk如n在肿瘤细胞信号转导调控中的作用提供了依据和线索。关键词：Gankyrin表达谱芯片差异基因AbstractGankyrinisanrecentlydiscoveredoncoprotein．Stmc觚any，humanGanky

5、rinproteincomains226锄inoacidsaJldiscomposedofseVen33一锄inoacidsankymrepeats．Gankyrinisanon．catalyticsubunitofme19Sregulatoryparticleofthe26SproteasomeandcombincswimtheS6bATPasespecially．InitiaUymeexpressionlevelofGankyrinwasfo啪dhigherinHCC(hepatomacarcinomacells)th

6、aninnonn2Llhepatomacells．Sincetllen，me缸1ctionofGankyrinhasbeeninveStigated．Reseachersf．o吼d也at(hnkyrincouldinteractwithanti．onCoproteinRBa11dpromoteitsdegradation．GaIlk妒ncouldeIlllance恤actiV耐ofunbiquitinE3ligaseMDM2，thuSfacilita：tingthede铲adationofP53·A1soincre2Lse

7、dGaIlky血waSfoundinRas-侄allsfomatedNIH3T3cells，implyingthatGaIlk皿nparticipatesinⅡ1eceU仃aIlsfonn撕onprocess．0merreportsdisplayedthatGank砸ncouldinteractwithCdk4(cycliIl-dependemkinase4)，all锄goIlisticfactorofp16INK4Aandp18斟K4C2．Gank)rrincouldalsointeract谢mRelAaIldi11ll

8、ibittheactivityofNF—kappaBsignalpa．tllway：ThestudiesmentionedabovehintⅡ眦GankyrinpanicipatesinseVemlsigllalpatllways．nplaysaniIIlportantroleint哪orsespeci