食管癌基因表达谱及其与细胞分化的相关性研究

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1、食管癌基因表达谱及其与细胞分化的相关性研究作者：李沛，凌志强，杨洪艳，黄幼田，赵继敏，董子明【关键词】食管肿瘤StudyongeneexpressionprofilesandthEirrelationtocelldifferentiationinhumanesophagealsquamouscellcarcinoma　　【Abstract】AIM:Toinvestigatethegeneexpressionprofilesandtoscreenthegenesrelatedtocelldifferentiationinprimaryesophageal

2、cancer,olecularmechanismofitstumourgenesis.METHODS:cDNAmicroarrayRNAfromboththeprimarycarcinomaandthecorrespondingesophagealepitheliumin15casesofhumanesophagealsquamouscellcarcinoma(ESCC).Theresultsatics.RESULTS:Amongthe886targetgenes,110(12.42%)genesonlyatleasttples.Thereethod;

3、validatingthEIrcellularfunctionsightbeusedasdiagnosticmarkersandtherapeutictargetsforESCC.　　【Keys;cDNAmicroarray;geneexpressionprofile;celldifferentiation　　【摘要】目的：研究原发性食管癌基因表达谱，筛选与肿瘤细胞分化相关的基因，旨在寻找或定位食管癌分化相关基因，加深对其癌变分子机制的了解.方法：应用基因芯片技术对15例ESCC癌组织和正常组织的mRNA进行检测，并用生物信息学对检测结果进行分析.结果

4、：在886条目的基因中有110（12.42%）条至少2次出现差异表达，与肿瘤分化直接相关的基因有16条（1.81%），其中表达上调的9条（1.02%），表达下调的7条（0.79%）.结论：高通量的基因芯片技术筛选出大量的ESCC相关基因，从中可分析出与肿瘤分化相关的基因.对这些相关基因功能的验证将有助于找到ESCC发生、发展的关键基因或通路，并可作为ESCC诊断的指标和治疗的靶点.　　【关键词】食管肿瘤；基因芯片；基因表达谱；细胞分化　　0引言　　食管癌（esophagealcarcinoma）是人类常见的恶性肿瘤之一.全世界每年约30万死于食管癌，其

5、中50%在我国，每年因食管癌死亡的人数约占我国全部恶性肿瘤死亡总数的1/4，严重危害人类健康［1］.食管癌按病理学类型主要分为鳞状细胞癌和腺癌.两者在病因学与病理学特征上存在明显差异，在中国主要以鳞状细胞癌为主.细胞分化异常导致上皮细胞发生恶性转化，是食管鳞癌发生的重要机制之一［1］.随着细胞分子肿瘤学的发展，食管鳞癌分化相关基因的筛选验证、基因表达调控机制的探讨已成为肿瘤领域的研究热点.本课题利用基因芯片技术对原发性食管癌的基因表达谱进行筛选，并探讨差异基因与食管癌细胞分化的相关性，旨在寻找或定位食管癌分化相关基因，加深对其癌变分子机制的了解.　　1

6、材料和方法　　1.1组织样本来源200301/200406郑州大学医学院附属医院普外科原发性食管癌患者15(男10，女5)例，中位年龄53岁，均经影像学、组织病理学和血清学检查，符合1990年《中国常见恶性肿瘤诊治规范》原发性食管癌诊断标准.临床病理资料完整，15例中高分化鳞癌4例，中分化鳞癌5例，低分化鳞癌6例；无淋巴结转移、临床Ⅰ/Ⅱ期患者7例，有淋巴结转移、临床Ⅲ/Ⅳ期患者8例.术前未接受任何放、化学治疗.手术切除后立即取食管癌组织及相应远端正常食管上皮组织在20～30min内快速冷冻在液氮罐中，此后保存在-80℃的冰箱中.剩余组织标本做病理切片

7、，并经3个病理医师分别诊断，得出共同的病理诊断报告，同时确证远端食管上皮均正常.　　1.2实验方法　　1.2.1激光捕获显微切割(lasercapturemicrodissection,LCM)8μm厚连续冷冻切片，行HE染色.将第一张封片镜下明确病理诊断，其余切片不封片，采用PixCellLCM200型系统（ActurusEngineering，MountainVieRNA提取和质量分析用改进的Gibco公司Trizol试剂一步法抽提细胞总RNA，用DNaseI消化去除基因组DNA.用OligotexmRNAMidiKit(Qiagen公司)纯化mR

8、NA，分光光度计测浓度和纯度，PCR检测有无DNA污染.　　1.2.3RNA扩增T7RNA多聚