猪前体脂肪细胞的分离培养

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1、细胞生物学杂志细胞生物学杂志ChineseJoumalofCellBiology2005,27:693-696细胞生物学杂志http://www.cjcb.org猪前体脂肪细胞的分离培养张国华杨公社屈长青孙世锋*(西北农林科技大学，动物脂肪沉积与肌肉发育实验室，杨凌712100)摘要在比较组织块法和消化法分离培养猪前体脂肪细胞的基础上，通过对前体脂肪细胞细胞生物学杂志增殖与分化过程中细胞的形态学变化、生长曲线、油红细胞生物学杂志0染色以及脂肪细胞特异性标志基因脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase,LPL)和过氧化物体增殖剂活化受体y(peroxisom

2、eproliferators-activatedrecepωry,PPAR1>表达的研究，证明用消化法可从猪的脂肪组织中分离获得大量的前体脂肪细胞，其生长旺盛，可见自发充脂;传代细胞经诱导培养后，充脂率大幅度提高，脂肪特异性标志基因表达增强。这为深入研究脂肪细胞增殖与分化以及猪体脂肪沉积提供了一个较好的模型。细胞生物学杂志关键词猪:前体脂肪细胞:传代:诱导脂肪细胞的体外培养始于20世纪60年代初。目1.1.2试剂和仪器DMEM培养基和I型胶原酶前，最常用的有两种体外培养系统，即前体脂肪细购自GibcoBRL公司:胎牛血清购白杭州四季青公胞系(preadipocy

3、tecellline)和原代前体脂肪细胞(p由n缸y司:牛血洁白蛋白购自Amersco公司:反转录试preadipocyteculture)。现己建立的最有代表性的两剂盒购自Fermentas公司;TRlzol购白天为时代:个前体脂肪细胞系是从小鼠胚胎的Swiss3T3细胞中细胞生物学杂志引物由上海生工合成;其他试剂均购自华美生物工细胞生物学杂志诱导分化出来的，即3T3-F442A和3T3-L1前体脂程公司:培养瓶和培养皿购白Corning公司。CO2肪细胞系，经诱导培养二者均能分化为脂肪细胞。培养箱(REVOC，USA),filJ置相差显微镜(Olympus，

4、几十年来，利用啃齿类前体脂肪细胞系在研究脂肪Japan)、酶联免疫检测仪(华东电子集团医疗装备有细胞分化和代谢机制方面已取得一定的成果[1]。在限责任公司)、超低温冰箱(Sanyo，Japan)、PCR仪细胞生物学杂志研究3T3-L1前体脂肪细胞系以及人、大鼠的前体脂(MJ-RESEARCH，USA)等。肪细胞增殖与分化时，发现cAMP信号通路在分化1.1.3主要试剂的配制细胞生物学杂志完全培养基:按说明取过程中发挥着重要的作用，但在猪上的研究却发5gDMEM培养粉，1.83gNaHC03,1.2gHEPES,现，cAMP信号通路在促进猪前体脂肪细胞分化时溶于4

5、50ml四蒸水中，加入50ml胎牛血清。诱作用并不明显[2]。说明脂肪细胞增殖与分化存在种导培养基:含50ng/ml氢化可的松、10μg/ml膜属差异。岛素、10μg/ml转铁蛋白，用完全培养基配制。胶猪具有肥胖的自然属性，也是最主要的肉用家原酶消化液:称取100mg1型胶原酶，1g牛血畜，其脂肪沉积量直接关系着肉的品质。在体外培洁白蛋白溶于100ml的PBS中。腆蛋白酶消化液:养条件下，猪脂肪细胞生脂调控具有其种属特异细胞生物学杂志称取0.25g膜蛋白酶溶于100ml的PBS中。上述细胞生物学杂志性。目前，国内己经有了在人口.4]、大鼠[5]1之牛[6]溶液均

6、经调整pH值至7.2-7.4，0.22μm微孔滤膜等动物上建立前体脂肪细胞培养模式的报道，但在正压过滤除菌，分装后置一20oc保在。油红0五作猪上相关研究还未见有报道。因此摸索建立猪的前液:称取4.2g油红0溶于1200ml异丙醇中，室细胞生物学杂志体脂肪细胞培养体系，对于研究其脂肪沉积与组织温静置过夜，分析滤纸过滤后收集滤液，并加入900细胞生物学杂志发育规律，具有重要的理论和现实意义。m1三蒸水，于4oc再次静置过夜后过滤两次即可于细胞生物学杂志室温贮存备用。1材料与方法1.2猪前体脂肪细胞的分离培养1.1材料收稿日期:2005-03-16接受日期:2005

7、-07-11国家重点基础研究发展规划(973计划)项目资助(No.2004CB1.1.1脂肪组织取自本校实验农场种猪场7日117506)龄仔猪，取材部位位于颈部皮下。*通讯作者。Tel:029-87032582,E-mail:ssdsm@tom.com细胞生物学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志694细胞生物学杂志·研究论文·1.2.1组织块培养法无菌状态下取仔猪颈部和色1min，自来水冲洗，甘油明版、封片。背部皮下约3g脂肪组织，用含高浓度青霉素和链1.6.2RT啡PCR检测传代细胞培养至第10天抽霉素的PBS缓冲液冲洗3次，剪去脂肪

8、组织中可见提细胞总RNA