猪前体脂肪细胞的诱导分化及13个群体aflp多态性研究

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1、山东农业大学硕士学位论文猪前体脂肪细胞的诱导分化及13个群体AFLP多态性研究姓名：胡艳霞申请学位级别：硕士专业：动物遗传育种与繁殖指导教师：曾勇庆20120614山东农业大学硕士学位论文中文摘要本论文对莱芜猪前体脂肪细胞的诱导分化和13个中外猪种(群)的AFLP多态性进行了研究。脂肪沉积性状是猪的重要经济性状，与猪肉品质密切相关。前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化能力的特异化细胞，对其增殖和分化机理的深入研究有助于了解脂肪沉积的调控机理。莱芜猪具有较强的脂肪沉积能力，其肌内脂肪含量丰富。本研究采集1

2、日龄莱芜猪仔猪颈、背部皮下脂肪组织，采用胶原酶与胰蛋白酶相结合的方法，分离原代前体脂肪细胞，进行前体脂肪细胞的原代和传代培养，并进行前体脂肪细胞诱导分化的研究，以Real．timePCR技术检测了前体脂肪细胞分化过程中关键基因PPARY的表达。结果表明：分离的猪原代前体脂肪细胞约8h后开始贴壁，贴壁的细胞呈短梭形或不规则的三角形，第3天多数细胞进入指数生长期，呈成纤维细胞样形态，细胞生长曲线近似S形：诱导培养结果显示，少量细胞在第2天开始出现脂滴，多数细胞在第3天出现脂滴，第7—8天小脂滴开始逐渐融合成较大

3、脂滴，在第12天左右融合成大脂滴，油红O染色呈橘红色。在前体脂肪细胞分化过程中PPAR丫基因mRNA的表达量逐渐增加，在诱导后的49h表达量最高，随后其表达丰度逐渐下降。本实验成功建立了莱芜猪前体脂肪细胞培养体系和体外诱导分化模型，为进一步研究莱芜猪前体脂肪细胞增殖与分化机制和猪体脂肪的沉积奠定基础。用12对AFLP引物组合检测了13个中外猪种(群)混合基因组DNA的遗传变异，并根据AFLP分析结果计算了13个猪种(群)间的遗传相似系数，据此构建了UPGMA聚类关系图。结果表明，AFLP标记有着很高的多态检

4、测效率，平均每对引物检测到76个多态位点，多态性比例为41．99％；观测的最高等位基因为1．6056，最低为1．2899，平均观测等位基因数目为1．4632；有效等位基因最高为1．4282，最低为1．2050，平均有效等位基因为1．3276；平均Nei基因多样度(H)为0．1919，平均信农指数(I)为0．2799。通过UPGMA聚类分析13个猪种(群)分成两个大类群，中国地方猪种与国外引进猪种间的遗传分化明显，亲缘关系较远，中国地方猪种之间亲缘关系较近。13个猪种分为两大类群，杜洛克、长白猪和大白猪聚为一

5、大类群，同为引进猪种：而中国地方猪种里岔黑猪、东北民猪、烟台黑猪、大蒲莲猪、徒河黑猪、沂蒙黑猪、莱芜猪、淮南猪、梅山猪和二花脸猪聚为另一大类群。第二大类群又分为三个小类群，第一类群包括里岔黑猪和东北民猪，第二类群包括烟台黑猪、大蒲莲猪、徒河黑猪、沂蒙黑猪、莱芜猪，第三类群包括淮南猪、梅山猪和二花脸猪。关键词：猪；前体脂肪细胞；细胞培养：分化；AFLP标记：遗传多样性I猪前体脂肪细胞的诱导分化及13个群体的AFLP多态性研究StudiesontheInducedDifferentiationofPorcine

6、PreadipocytesandthePolymorphismof13pigbreedsusingAFLPmarkersABSTRACTWestudiedtheinduceddifferentiationofporcinepreadipocytesandthepolymorphismgeneticrelationshipof13pigbreedsusingAFLPmarkersinthisthesis．Fattydepositionisanimportanteconomicaltraitinpigbreed

7、ing，andithasbeenshownt0becloselyrelated晰tIltheporkquality．Preadipocytesareatypeofspecialprecursorcells、析mtheabilityofgenerationanddifferentiationtowardsadipocyteswhosedeeplystudyofmechanismofgenerationandcelldifferentiationisusefultocomprehendregulationmec

8、hanismoffattydepositionincells．LaiwuBlackisasuperordinateindigenouspigbreed，whichhavethehiglllycapableoffattydeposition，andhavetheabundantintramuscularfat．Inthisstudy,preadipocyteswereisolatedfromsubcutaneous