原代猪前体脂肪细胞培养方法的优化

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1、细胞生物学杂志细胞生物学杂志ChineseJoumalofCellBiology2005,27:697千00细胞生物学杂志http://www.cjcb.org原代猪前体脂肪细胞培养方法的优化李影杨公社卢荣华孙世锋*(西北农林科技大学，动物脂肪沉积与肌肉发育实验室，杨凌712100)摘要以胎猪皮下脂肪组织为材料，比较不同培养方法、消化酶、筛网孔径和离心力对培细胞生物学杂志养猪前体脂肪细胞的影响。结果表明，组织块法与消化法均可培养出猪前体脂肪细胞，但组织块细胞生物学杂志法培养的原代细胞中分化为成熟的细胞较少，消化法获得的细胞均匀一致，形态学染色鉴定大部分均可分化为脂肪细胞;在用消化法培养的过程

2、中，采用IV型胶原酶消化脂肪组织，200目筛网孔径、800g离心力离心5min可获得大量的、纯度均一的细胞。可以认为，实验成功建立了猪前体脂肪细胞培养的优化体系，在体外重现了猪前体脂肪细胞增殖肥大的全过程。细胞生物学杂志关键词猪:前体脂肪细胞:培养方法前体脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分50ml胎牛血清，加入各100IU/ml青、链霉素，化能力的特异化细胞，它持续存在和作用于人和动四蒸水定容至500ml。消化液:称取100mg凹物的一生[1]。脂肪细胞增殖和分化失控会导致肥型胶原酶，1g牛血清白蛋白溶于100ml的无血清胖，并与糖及脂肪代谢、机体能量平衡、肥胖症、培养液中。上述溶液均经调

3、整pH值至7.2-7.4，0.22、11型糖尿病等有非常密切的关系。因此，选择合适细胞生物学杂志0.45μm微孔滤膜过滤除菌，分装后置4.C保存。细胞生物学杂志的动物模型在体外重现前体脂肪细胞增殖肥大的全油红0工作液:称取4.2g泊红0，溶于1200ml过程对于探讨上述生命和疾病过程具有重要意义。异丙醇中，室温静置过夜，分析滤纸过滤后收集滤猪是肥胖程度最高的动物，脂肪沉积最迅速，且与液，并加入900ml三蒸水，1昆匀，室温贮存备用，啃齿类哺乳动物及禽类的脂肪沉积部位及沉积模式临用前再过滤两次。细胞生物学杂志存1在显著差异，与人的更为接近[11，因而猪的脂1.2方法肪细胞增殖与分化模式为研究人

4、类机体脂肪沉积提1.2.1组织块法培养胎猪前体脂肪细胞细胞生物学杂志无菌切供了一个理想模型，同时为研究不同动物的脂肪沉取胎猪颈、背、腹部皮下脂肪组织，KRB缓冲液积模式提供参考。目前，国内己成功建立了大鼠、(KrebsRingerBicarbonatebuffer)冲洗3次，分离去小鼠、人、棋牛和兔的前体脂肪细胞体外培养模除脂肪组织中可见的纤维及血管，剪成约1mm3的型，但尚未见成熟的猪前体脂肪细胞培养体系的建小块，用眼科探针轻轻地将组织块平铺于干燥的培立。本实验获得大量的生物学性状良好的猪前体脂养瓶底壁，然后将培养瓶翻转，向瓶内注入适量基肪细胞，为在体外研究人及动物体脂沉积打下了基础培养液

5、，于37.C、5%CO2培养箱内培养，4础。细胞生物学杂志h后翻转培养瓶，继续于培养箱内培养。细胞生物学杂志1.2.2消化法胎猪前体脂肪细胞培养取材同上1材料与方法述方法，向剪碎的组织块中加入1mg/L的IV型胶1.1材料原酶消化液，置37.C振荡摇床内温育60-80min细胞生物学杂志后细胞生物学杂志1.1.1组织来源西北农林科技大学实验猪场60取出，然后将消化液分组，各组分别过孔径为日龄流产长白胎猪。细胞生物学杂志150、200和600目不锈钢细胞筛，滤液分别以801.1.2主要试剂DMEMlF12培养基、凹型胶原g、300g、800g离心5、10min，无血清培养酶、HEPES、均购自

6、Gibco公司，胎牛血清(杭州收稿日期:2005-04-08接受日期:2005-07-11四季青)，其他试剂均为分析纯。国家重点基础研究发展规划(973计划)项目资助阴0.2ω4CB1l7506)1.1.3培养基及主要试剂的配制依次称取5g*通讯作者。Tel:029-87032582,Fax:029-87092430,E-mai1:DMEMlF12培养基，1.83gN址IC03，1.20gHEPES,ssdsm@tom.com细胞生物学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志细胞生物学杂志698细胞生物学杂志·研究论文·液洗2遍。沉积的细胞用基础培养液制成细胞悬表1不同离心力和离心时间

7、所获得的细胞数及细胞存活率离心力(g)青心时间(min)细胞数(xl05)细胞存活率(%)液，进行细胞计数和存活率检测。9滴细胞悬液加80516.1:1:0.145'98.91滴0.4%台盼兰.染液混匀，3min内用血细胞计数801017.9主0.189'b98.2板分别计数活细胞及死细胞的数目，每组计数3300519.5:t0.744bc96.8次，取平均数作为最后结果，将计数后的细胞以5.03001021