葛根素对前脂肪细胞分化的影响

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1、葛根素对前脂肪细胞分化的影响硕士研究生：冯雅静指导教师：范晓磊教授指导小组：黄敏教授张卓然教授专业名称：病原生物学摘要目的：肥胖在胰岛素抵抗、2型糖尿病的发病中起关键作用．，抑制食欲、增加能量消耗有利于2型糖尿病的防治。脂质代谢紊乱和胰岛素抵抗为2型糖尿病患者的主要特征，也是糖尿病患者易合并心、脑血管病的主要原因。在临床治疗糖尿病时，由于胰岛素在．脂肪细胞分化及糖脂代谢中的作用，临床使用胰岛素及促胰岛素分泌剂磺酰脲类药物患者出现体重增加；胰岛素增敏剂噻唑皖二酮(Thiazolidinediones，TZDs)类药物，通过激活PPAR丫(Peroxisom

2、eproliferators．activatedreceptorsT)转录因子，增加胰岛素敏感性的同时，诱导脂肪细胞分化，增加患者体重。现已证实葛根素可以有效改善2型糖尿病患者胰岛素的敏感性，在临床上主要作为糖尿病治疗的辅助治疗。葛根素是否对糖尿病患者体重变化有影响，目前尚不清楚，研究葛根素对糖尿病患者体重的影响情况，将为进一步阐明其治疗糖尿病的作用机制提供了依据。方法：将3T3一L1前脂肪细胞以5×10’每孔的浓度接种于6孔培养板，一天以后可以达到融合。用含10％胎牛血清的DMEM高糖培养液在37℃，5％C0，培养，待细胞融合2天后，加0．5mmol／

3、L异丁基一甲基一黄嘌呤，0．25¨g／ml地塞米松和l

4、Ig／ml胰岛素的培养液再培养48h，随后以10％胎牛血清高糖DMEM继续培养，40pg／ml浓度的葛根素在诱导的第一天开始加入培养液，直到实验结束，分化lO～12天的细胞用于实验：用O．1mg／ml油红O染色2小时，倒置显微镜下观察结果，拍摄图片。采用两步法半定量一逆转录聚合酶链反应(ReverseTranscriptionPolymeraseChainResponse，RT-PCR)检测PPAR72(Peroxisomeproliferators．activatedreceptors2，PPAR

5、y2)mRNA的表达水平。细胞分空白对照组和40pg／ml葛根素组。以Trizol提取诱导分化完全的总RNA，用AMV逆转录酶把总RNA逆转录为eDNA。以琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物，用FX．MAC进行扫描分析。PPAR72的蛋白质免疫印迹分析，DAB显色液显色，FX．MAC进行扫描分析结果。结果：一、前脂肪细胞诱导分化1O天后，空白对照组细胞呈现典型的脂肪细胞表型，90％以上细胞中富含较大脂滴，而葛根素处理组，仅20"--30％的细胞出现较大的脂滴，其油红0的着色明显较空白组淡。二、MTT结果显示，葛根素处理组浓度分别为lO、20、40pg／ml时，M

6、TT检测OD值分别为0．3848±0．0169、0．4105±0．0201、0．4328±0．0195，与空白对照组相比均为P

7、6±0．02108、1．1794±0．01937、0．7765±0．01877，40pg／ml葛根素处理组与空白对照组相比P

8、PPAR72基因表达2Effectofpuerarinonthedifferentiationof■●』preadlpOcyteMasterdegreecandidate：FengYajingSupervisor：ProfessorFanXiaoleiVice—supervisor：ProfessorHuangmin"ProfessorZhangzhuoranMajor：PathogenicBiologyAbstractObjective：Obesityplaysakeyactioninthediseaseoftype2diabetesandinsuli

9、nresistance．Itisbeneficialforpreventiona