psma1对牛前体脂肪细胞分化及脂质沉积的影响

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1、PSMA1对牛前体脂肪细胞分化及脂质沉积的影响TheEffectofPSMA1GeneonBovinePreadipocyteDifferentiationandLipidDeposition作者姓名：周乾专业名称：动物营养与饲料科学指导教师：陈承祯副教授学位类别：农学硕士答辩日期：2015年6月3日中文摘要PSMA1对牛前体脂肪细胞分化及脂质沉积的影响脂肪组织对机体能量代谢和平衡具有重要作用，同时对于动物的肉质具有重要影响。肌间脂肪含量是影响牛肉的嫩度、多汁性和口味的重要因素之一。而前体脂肪细胞是具有增殖和向脂肪细胞分化能力的特异化细胞，其增殖和分化会影响

2、脂肪沉积及肌间脂肪含量，进而影响牛肉肉质。研究表明，TNNT1、HBA、HBB、MB、MYLPF、MYL1、PGAM2、MYL6B、HSPB1、TPI、MSRA、TNNI2、TNNT3、TCAP、TXN、PSMA1、GSTM1、COX6B1、VDAC1、GSTP1等基因在不同肌间脂肪沉积情况的牛肉中存在差异表达。本研究首先分离牛前体脂肪细胞，诱导其分化为成熟脂肪细胞，通过油红O检测脂类沉积情况，并通过实时荧光定量PCR及WesternBlot检测上述基因在前体脂肪细胞分化前后的mRNA及蛋白表达情况。结果表明，PSMA1、HBB、COX6B1、MYLPF、T

3、PI、PGAM2、HBA、TCAP、GSTP1、MB、TXN、GSTM1、MYL6B、MSRA、HSPB1、TNNT1在前体脂肪细胞分化后mRNA和蛋白质的表达量上升，而VDAC1、MYL1表达量下降，TNNI2、TNNT3没有检测到表达。同时，前体脂肪细胞分化后脂质沉积明显加大，说明这些基因可能在调节前体脂肪细胞分化、脂质沉积中具有潜在作用。随后，本研究选择表达差异较大的PSMA1基因作为研究对象，探求其在牛的前体脂肪细胞分化及脂质沉积的作用。首先将合成的siRNA通过脂质体2000转染至前体脂肪细胞中，特异性敲减PSMA1的表达，通过油红O染色、甘油三酯

4、含量检测及荧光定量PCR法分别检测脂质沉积情况及前体脂肪细胞分化标志基因的表达情况。结果表明，PSMA1的低表达会抑制脂肪细胞中脂滴形成和聚集，脂肪细胞甘油三酯累积减少，部分分化标志基因表达量显著下降。这些结果对明确前脂肪细胞分化及脂质沉积机制、为在分子水平上调控牛脂肪沉积、改善肉质提供了理论依据。关键词：牛，PSMA1，前体脂肪细胞分化，脂质沉积IAbstractTheEffectofPSMA1GeneonBovinePreadipocyteDifferentiationandLipidDepositionAdiposetissueisimportantt

5、obothenergystorageandmetabolismregulations,andisiscrucialforthemeat.Intramuscularfatisamajorindicatorofthetenderness,juicinessandflavorofbeef.Preadipocytescanbeinducedtoadipocytesbydifferentiation.Proliferationanddifferentiationofpreadipocytesaffectbothlipiddepositionandintramuscul

6、arfat,andtheninfluencethemeat.ThestudieshaveshownthatTNNT1，HBA，HBB，MB，MYLPF，MYL1，PGAM2，MYL6B，HSPB1，TPI，MSRA，TNNI2，TNNT3，TCAP，TXN，PSMA1，GSTM1，COX6B1，VDAC1，GSTP1geneshavedifferentialexpressionsinbeefcattlewithdifferentfatdepositionabilities.First,weculturedbovinepreadipocytes,andind

7、ucedtobeadipocytes.WedetectedtheexpressionofthesegenesinpreadipocytebyqRT-PCRbothbeforeandaftertheinducing.ThelipiddepositionabilitieswerealsomeasuredbyOilRedOstaining.ResultsindicatedthatthemRNAandproteinexpressionofPSMA1,HBB,COX6B1,MYLPF,TPI,PGAM2,HBA,TCAP,GSTP1,MB,TXN,GSTM1,MYL6

8、B,MSRA,HSPB1,TNNT1wereincr