荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中的应用

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1、荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中的应用导师：张玉奎学生：张琳中科院大连化学物理研究所1810组引言常用荧光衍生化试剂应用简介展望汇报内容衍生的目的衍生发应方式荧光衍生试剂的构成引言衍生化反应方式在线(online)离线(offline)从衍生反应的场所来分柱前衍生化(pre-columnderivatization)柱上衍生化(on-columnderivatization)柱后衍生化(post-columnderivatization)从是否与仪器联机的角度来分从是否形成共价键来分标记非标记荧光衍生试剂的基本构成取代基荧光团（试剂分子母体）反应

2、基团胆磺酰肼DNS-HI胺类化合物的衍生试剂芳香邻二醛类OPA异硫氰酸酯类FITC酰氯类FMOC活性卤类NBD-ClN-羟基琥珀酰亚胺活性酯类AQC邻苯二甲醛OPA4-氯-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑NBD-Cl荧光素异硫氰酸酯FITCFMOC芴代甲氧基酰氯6-氨喹啉基琥珀酰亚胺碳酸酯AQC常用胺的衍生试剂分子式邻苯二甲醛OPA衍生分离氨基酸的色谱图JChromatorgr.1990,499:557集成化微流控芯片氨基酸分析仪高等学校化学学报2004,25:189~190FMOC衍生分离氨基酸的色谱图JChromatorgr.1990,499:

3、557FMOC与CEOC衍生分离氨基酸的比较Anal.Biochem2003,31317~27图3CEOC衍生胺类化合物色谱分离图（23种）图2FMOC衍生胺类化合物色谱分离图（23种）FMOC与CEOC衍生分离脂肪胺的比较II醇、酚的衍生试剂羰基氯类：FMOCCEOC磺酰氯类:DNs-Cl卤代三嗪类:EDTN1-乙氧基-4-(二氯-三嗪)萘（EDTN）CEOC衍生醇类荧光检测色谱分离分析化学2003,31,62~651.苯酚2.对氯苯酚3.2,5-二甲基苯酚4.2,4-二氯苯酚5.1,4对苯二酚CEOC衍生酚类荧光检测色谱分离III羰基化合物的衍

4、生试剂肼类DNs-HCEOC-H氨基类氨基甲基芘肼和胺与羰基化合物的反应1.乳糖2.甘露糖3.葡萄糖4.鼠李糖5.山梨糖(FLdetection)咔唑-9-乙氧基羰基肼(CEOC-H)柱前衍生中性糖高效液相色谱分离IV羧酸类化合物的衍生试剂溴甲基类BrMMC哌嗪基类DBD-Pz重氮甲烷基类ADAM其它类9-(2-羟乙基)-吖啶酮HEA4-氨甲基-6，7-二甲基香豆素(ADMC)7-N-哌嗪-4-二甲氨基苯并呋喃9-蒽重氮甲烷9-蒽重氮甲烷(4-溴甲基-7-甲氧基香豆素)荧光衍生试剂与羧酸的反应4-氨甲基-6,7-二甲基香豆素(ADMC)衍生羧酸色谱

5、分离图Anal.Sci.1996,12:189Fig.1胆汁酸分离色谱图（荧光检测）.衍生物的激发和发射波长分别为ex=404,em=440nm9-(2-羟乙基)-吖啶酮HEA衍生胆汁酸色谱分离图V分离对映体的手性荧光衍生试剂ToshimasaToyo’okaJapanJ.C.A1998822215~224手性荧光衍生试剂R(-)DBD-PyNCS衍生分离DL氨基酸OPA与手性硫醇衍生分离DL氨基酸N-异丁酰基-D(L)-半胱氨酸(IBDC和IBLC)J.C.A1999832123VI蛋白质的衍生试剂目前常用衍生蛋白质的荧光标记试剂有：邻苯二甲

6、醛(OPA)4-氟-7-硝基苯并恶二唑(NBD-F)荧光素异硫氰酸酯(FITC)3-呋喃甲酰喹啉-2-羰醛(FQ)邻苯二甲醛OPA衍生马心肌红蛋白质毛细管电泳分离Fig.5OPA柱后标记马心肌红蛋白质毛细管电泳图J.Am.Chem.Soc.1995,117:33253-呋喃甲酰喹啉-2-羰醛FQ衍生蛋白质毛细管电泳分离J.Am.Chem.Soc.1989,111:5008VII核酸的衍生试剂DNA序列分析中所用的四种荧光衍生试剂Nature1986,327:674DNA测序仪及电泳图展望分析化学中的有机试剂在分析化学中占有与分析仪器同等重要的地位，

7、荧光衍生化试剂则是有机分析试剂的一类重要分支。性能优良的荧光衍生化试剂可能将成为某些物质的高灵敏高选择性分析的关键，荧光衍生试剂的开发与应用也正朝这个方向发展。在实际工作中将可能遇到各种现有荧光衍生试剂所不能解决或不能很好解决的问题。有必要根据实际工作的需要来开发研究新型的荧光衍生试剂ThankYou!