高效液相色谱手性试剂衍生化法及其应用

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1、文献综述高效液相色谱手性试剂衍生化法及其应用曾苏（浙江医科大学药物分析教研室杭州310031）应有相同的衍生化速率。另外，从对映体杂质的最小1前言检出量考虑，杂质峰最好在主峰之前洗脱，通过换用随着手性药理学的兴起，色谱法分离手性对映两种不同构型的手性试剂可容易地达到这一目的。（2）手性试剂和反应产物在衍生化反应和色谱体也就成为生物医药分析最有意义的领域之一，同条件下应是稳定的。为了防止消旋化，反应条件应尽时也是色谱学研究最重要的分支—手性色谱可能温和简便。为了保证分析方法的准确性，衍生化学（1～3）。对对映体分析产生巨大兴趣的原因有：（1）许多药物对映体不仅药理作用不同，而且生物转化反应

2、需定量完成（90～100％ィ）。（3）衍生化反应生成的非对映体对在色谱分离过程亦有差异（4）。例如临床广泛使用的β阻滞剂如时应能显示高柱效。这在生物药物分析中尤为重要，普萘洛尔，其S-对映体生物效价是R-对映体的因痕量的非对映体衍生物需要在大量内源性化合物100倍，而R型代谢速率则比S型快。为了探讨对映存在下测定。为达到高柱效，应选择最佳色谱条件，体生物效应的体内差异，就需要建立生物样品中拆如RP或NP、流动相组成、添加剂、pH和柱温等。分和测定对映体的分析方法；（2）有一些药物以纯对（4）手性试剂应具有UV或荧光等敏感结构。尽映体供药用，对其光学纯度的质量控制，手性色谱法管手性衍生化的

3、目的是将对映体转变成能良好分离比经典的旋光法提供更为可靠的数据（5,6）；（3）不对的非对映体对衍生物，但是真正优良的试剂同时还称合成的发展也促进建立手性色谱法用于测定合成应使生成物具有良好的可检测性。例如具有萘结构的起始物质、中间体和最终产物。目前手性色谱法中，应用最广泛的当属高效液的手性试剂与胺类反应，最低UV检测限约10ng，若衍生物具有荧光，检测限则可达1ng以下。这在对相色谱法（HPLC），其分离对映体的方法有三种（7）手性固定相法（CSP），手性流动相添加剂法映体浓度低的生物药物分析和相对纯的对映体中痕（CMPA）和手性衍生化试剂法（CDR）。第三种方法量光学杂质的测定时显得

4、特别重要。（5）手性化合物对映体的化学结构中应具有易费用较少，易于在基层单位使用，因此本文仅就于衍生化的基团，如氨基、羧基、羟基和巯基等。CDR法及其应用作一简要介绍。2手性衍生化试剂的反应条件3手性试剂的种类和应用酰化试剂（10～12）酰化试剂是由羧酸衍生的，一般为了有效地分离和准确地测定对映体，CDR及手性碳原子位于羧基的a位，主要用于分离胺和醇其衍生化反应需要满足以下条件（3,7～9）（1）手性试剂和反应产物在化学上和手性上都类。主要应用形式有：酰氯、酸酐、酯。其中酰氯的反应性最强，即使是仲胺、仲羟基也能反应，但性质欠很稳定。手性试剂应是光学纯且在贮存中不发生改稳定，如市售的N-三

5、氟乙酰-S-脯氨酰氯，在存放变。在衍生化反应中，试剂、手性药物和反应产物不过程中可能发生消旋化生成百分之几到十几的R对应发生消旋化反应。若有光学纯对映体，试剂中对映映体。酸酐的反应性次之，可由羧酸与光气制备。游体杂质量或消旋化率可通过检测其非对映体杂质的离羧酸的酰化反应，需要缩合剂存在如二环己基碳相对峰面积来确定，一般应少于1％。若用于测定痕二亚胺（DCC）和1,1'-羰基二咪唑（CDI）等，有时还量对映体杂质，则试剂光学纯度要求更高。各对映体本文收稿日期：1993年9月11日，修回日期：1993年12月27日加催化剂。常用的反应溶剂是CH2Cl2，甲苯和苯。过后者反应条件温和。若用1-

6、（3-二甲胺基丙基-3-乙量的试剂，一般于色谱前除去。基-碳酰亚胺（wsc）和1-羟基苯并三唑（HOBT）可获得高产率的酰胺衍生物。广泛应用的手性胺试剂都具有苯环、萘或蒽结构，以提高检测灵敏度。如1取代苯乙胺、萘乙胺、蒽乙胺、二甲胺基萘乙胺（DANE）、对硝基苯乙胺等。图1是形成酰胺非对映体对的反应类型。异（硫）氰酸酯类（1～1）异氰酸酯一般以干燥甲苯为溶剂，由相应的胺与光气制得。常用的试剂有苯乙基异氰酸酯（PEIC）、萘乙基异氰酸酯（NEIC）、脱氢枞酸基异氰酸酯等，主要用于分离胺和醇类对映体。这类试剂与胺反应生成脲，与醇反应生成氨基甲酸酯类，反应通常在CH2Cl2、甲苯、CHCl3中

7、进行。PEIC与胺类在室温下反应30min可完成；而与醇类则需70反应30min，亦可加4-二甲胺基吡啶催化反应。这种反应性的差异可用于选择性地衍生化β-阻滞剂的氨基。酚羟基在相同条件下反应要慢得多。异硫氰酸酯早已用于肽类顺序和氨基酸分析。手性异硫氰酸酯可由相应的胺与硫代光气或CS2反应，再与氯甲酸乙酯缩合制得。常用的试剂包括；2,3,4,6-四-O-乙酰基-βD-吡喃葡萄糖异硫氰酸酯(GITC),2,3,4-三-O-乙酰基-a-D