荧光标记试剂的合成表征及其在高效液相色谱质谱中的应用

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1、曲阜师范大学硕士学位论文荧光标记试剂的合成表征及其在高效液相色谱-质谱中的应用姓名：朱芳申请学位级别：硕士专业：化学无机化学指导教师：尤进茂20070401摘要高效液相色谱因其强大的分离分析能力已被广泛应用于许多研究和工业领域如生物化学、毒物学、化学化工、临床医学、神经生物学、食品卫生、环保检测和质量控制等。该法也是分析化学中发展最快、应用最广泛的领域之一。然而，由于样品中被测组分本身性质及其低含量的限制，并非所有化合物都可直接用于液相色谱分析。因此提高方法的检测灵敏度具有非常重要的意义。荧光检测具有很高的灵敏度，利用荧光标记技术使本身

2、不发荧光的化合物(如氨基酸、脂肪胺、脂肪酸等)转化成发射荧光的衍生物，能够实现高灵敏荧光检测。本文重点研究了几种新型荧光标记试剂的合成和表征，考察了荧光标记试剂的光谱性质，优化了衍生反应条件、色谱分离条件，并将建立的方法应用于不同生物样品的分析。具体工作如下：第一章：介绍了荧光原理及荧光标记法。简述了高效液相色谱的发展及其基础知识。综述了荧光标记试剂在羧酸类、羰基和羟基化合物的高效液相色谱分析中的应用。第二章：三种荧光标记试剂：2-(2-(10·葸基)一萘[2，3．d】咪唑)．乙基-对甲苯磺酸酯(ANITS)，2-(IIH-苯[a]咔唑

3、)乙基肼基甲酸酯(BCECH)、2-(IIH-苯[a】咔唑)异丙基氯甲酸酯(BCPC．c1)的设计合成、结构表征、光谱性质研究。第三章：荧光标记试剂ANITS用于脂肪酸的高效液相色谱．质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化，建立了脂肪酸的柱前衍生高效液相色谱荧光检测法，并将该方法用于油菜蜂花粉样品的测定，检验了所建立的分析方法的可行性。第四章：荧光标记试剂BCECH用于类固醇的高效液相色谱一质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化，建立了类固醇的柱前衍生高效液相色谱荧光检测法，并将该方法用于狼粪样品的测定，检验了所建立的分

4、析方法的可行性。第五章：荧光标记试剂BCPC．CI用于雌二醇的高效液相色谱分析。通过对衍生化条件的优化，建立了雌二醇的柱前衍生高效液相色谱荧光检测法，并将该方法用于狼粪样品的测定，检验了所建立的分析方法的可行性。第六章：研究了丹酰氯(Dns．c1)用于多羟基酚及黄酮类化合物的高效液相色谱．质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化，建立了多羟基酚及黄酮类化合物的柱前衍生高效液相色谱荧光检测法，并将该方法用于藏药肋柱花的分析中，检验了所建立的分析方法的可行性。关键词：高效液相色谱．质谱，荧光标记试剂，柱前衍生，脂肪酸，类固醇，雌二醇，

5、多羟基酚及黄酮类化合物IIAbstractHighperformanceliquidchromatography(HPLC)．duetoitspowerfulseparationcapacity,hasbeenenthusiasticallyandwidelyadoptedinmanyfieldsofscientificresearchandindustry,such鹬biochemistry,toxicology,clinicalsciences，chemicalindustry,clinicalmedicine，neurobiolo

6、gy,foodhygiene，euvirenmentalscieuceandqualitycontr01．Itisalsooneofthefastestdevelopingandthemostwidelyusedmethodsinanalyticalchemistry．However,nota11compoundsRresuitabletobedirectlyanalyzedbyHPLCbecauseofthelimitationofthecompoundpropertiesandtheverylowcontentsofthecorre

7、spondingcompounds．Soitisimportanttoenhancethesensitivityofdetection．Currently,fluorescencedetectionisstillrecognizedtobeoneofthemostsensitivedetectiontechnologies．Therefore，derivatizationofanalyteswithfluorescencelabelingreagentshasbeenwidelyadopted．Itc锄alterthechcanical

8、andphysicalpropertiesoftargetcompoundsandmakethemeasiertoa．rudyze．Inthispaper,Wedesignedandsynthesizedt