高效液相色谱及荧光标记的应用进展

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1、分类号密级UDC编号中国科学院研究生院硕士学位论文胺类和酸类化合物的荧光标记及HPLC-MS分析康丽指导教师尤进茂教授博士中科院西北高原生物研究所申请学位级别硕士学位学科专业名称植物学论文提交日期2011年5月论文答辩日期2011年5月培养单位中国科学院西北高原生物研究所学位授予单位中国科学院研究生院答辩委员会主席硕士学位论文胺类和酸类化合物的荧光标记及HPLC-MS分析康丽指导教师：尤进茂教授博士学科专业：植物学研究方向：应用植物化学申请学位：硕士学位培养单位：中国科学院西北高原生物研究所论文提交日期：2011年5月论文答辩日期：2011年5月答

2、辩委员会主席：中国科学院研究生院2ThesisforMasterDegreeGraduateUniversityoftheChineseAcademyofSciencesHPLC-MSDeterminationofAminesandAcidswithPre-ColumnFluorescenceDerivatizationbyLiKangSupervisor:Prof.JinmaoYouSpeciality:PhytochemistryNorthwestInstituteofPlateauBiologyChineseAcademyofSciences

3、May,2011,Xining,Qinghai,China摘要摘要在液相色谱领域，化学衍生化是改善色谱分离，提高检测灵敏度和选择性的一种行之有效的手段，因此新型衍生化试剂的开发和新型衍生化试剂在高效液相色谱中的应用研究一直是色谱领域中最为活跃的研究方向之一。目前，液相色谱领域中应用的衍生化试剂种类繁多，但是这些试剂都或多或少有一些缺陷，因此研究具有高选择性、高灵敏度、通用性和强分离能力的新型荧光衍生化试剂在高效液相色谱中的应用具有重要的意义。本论文主要研究了吖啶酮类和双苯并咔唑类荧光衍生试剂对生物胺、芳香胺、饱和及不饱和脂肪酸等标准品的衍生化和高效

4、液相色谱分离分析，通过优化衍生条件、色谱条件，建立了高效、灵敏的反相高效液相色谱方法，并应用于实际样品分析。具体工作如下：1、简述了高效液相色谱和高效液相色谱-质谱联用的研究进展和基本理论；介绍了化学衍生化和荧光原理；总结了广泛使用的荧光衍生试剂。2、吖啶酮荧光性质研究。吖啶酮母体环中N、O杂原子处于对位可借助共轭性的骨架进行烯醇式互变异构，易形成烯醇式结构，从而大大改善了衍生物的亲水性，有利于衍生产物的洗脱；并且烯醇式结构的出现，提高了衍生物的质谱离子化效率，有利于衍生物的质谱鉴定。3、利用10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯(EASC)作为柱前衍生试剂

5、，用于生物胺和芳香胺的高效液相色谱分析。通过对衍生反应、色谱、质谱条件的优化，建立了生物胺和芳香胺的柱前衍生高效液相色谱分离荧光检测分析方法，并将所建立的方法应用于实际样品的定性和定量分析，结果满意。4、利用2-(7H-二苯并[a，g]咔唑)乙基对甲苯磺酸酯(DBCES)作为衍生试剂，用于饱和及不饱和脂肪酸的高效液相色谱分析。通过对衍生化条件的优化，建立了定量测定脂肪酸的高效、灵敏方法，并将此方法应用到实际样品西洋参、当归和鸡血藤的定量定性分析。结果表明，建立的方法快速、简单、重现性好、灵敏度高，适用于多种实际样品的分析测定。关键词：高效液相色谱-

6、质谱；柱前衍生试剂；生物胺；芳香胺；饱和及不饱和脂肪酸IAbstractAbstractInthefieldofliquidchromatography,chemicalderivatizationhasbeenwidelyusedtoimproveseparationcapacity,sensitivityandselectivity,sodevelopingderivativationreagentswithhighsensitivityandstudyingtheirapplicationsinHPLChasbecomethemostacti

7、veareasofliquidchromatography.Inrecentyears,agreatdealoflabelingreagentshasbeenwidelyused,however,thesereagentsmoreorlesshavesomedrawbacks.Therefore,itisimportanttodevelopnewfluorescentderivatizationreagentswithhighselectivity,highsensitivity,versatilityandstrongseparationcapa

8、bility,andtheirapplicationinhighperformanceliquidchromatograp