高效液相色谱荧光检测法同时测定

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第3期2010年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry429～433DOI:10.3724/SP.J.1096.2010.00429高效液相色谱-荧光检测法同时测定蔬菜中3种磺胺类药物残留1，211222*1李学德鲜啟明刘红玲花日茂许珊珊陈海燕于红霞1(南京大学环境学院，污染控制与资源化研究国家重点实验室，南京210093)2(安徽农业大学资源与环境学院，安徽省农产品安全重点实验室，合肥230036)摘要建立了蔬菜中3种磺胺类药物(SAs)的高效液相色谱-

2、荧光检测法。蔬菜样品用甲醇提取3次，将提取液浓缩干，用0.1mol/LHCl溶解残渣，经荧光胺衍生化后，用反相柱(ODS)分离，以乙腈和0.5%醋酸为流动相进行梯度洗脱，用荧光检测器检测。3种SAs的检出限(LOD)为1.02～1.29μg/g，方法的定量限(LOQ)为3.4～4.3ng/g(鲜重)。蔬菜样品中SAs的添加浓度在0.2～1.0ng/g范围内，3种SAs的平均回收率均大于87%，日内与日间RSD均小于10%。实际蔬菜样品测定结果表明，3种SAs在不同蔬菜中均有不同程度检出，总含量为0.0726～0.3709μg/g(鲜重)。关

3、键词蔬菜;磺胺类药物;高效液相色谱荧光检测;测定方法1引言磺胺类药物(Sulfonamides，SAs)因其抗菌谱广、抗菌作用较强且价廉易得，广泛应用于畜牧及水产［1，2］［3，4］养殖动物的疾病防治。同时，人类医疗也大量使用SAs。据报道，动物使用抗生素后，有40%～90%抗生素以母体药物和代谢物的形式随粪尿排出体外，SAs可以在畜禽粪尿中长期存在，并通过多种途径进入环境而造成环境污染。尤其是随着动物粪肥的农用，越来越多的抗生素进入农田土壤。［5］Burkhardt等估计，每年进入农田土壤的磺胺类药物约几十～几百克/公顷。珠三角地区菜地土

4、壤中［6］［7］SAs总含量为53.68～155.24μg/kg。SAs可以被农作物吸收蓄积，威胁农产品安全，最终通过食物链影响人体健康。长期摄入SAs不仅会导致人体内的细菌产生抗药性，而且可以影响泌尿和免疫系［8］统，破坏肌肉、肾脏和甲状腺等组织，甚至诱发甲状腺癌。目前，人们只重视动物性食品(肉、蛋、奶［9，10］等)中SAs的残留检测分析，国际食品法典委员会(CAC)和许多国家都规定了食品中SAs的最大［11］残留限量(MRL)，而对蔬菜等植物性食品中SAs的污染问题尚未引起重视。由于环境样品中磺胺类含量通常很低，现有的分析方法大多通过

5、提取、液液分配、再经固相萃取(SPE)富集净化后利用HPLC［6，12，13］分析，测定过程较烦琐。本研究建立了HPLC法同时测定蔬菜中3种SAs的方法，样品经提取、浓缩后，通过柱前衍生化后分离测定，省去了净化过程，方法灵敏、快速、高效、经济。2实验部分2.1仪器与试剂1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，配荧光检测器;EYELAN-1100旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司);L-530离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司);SHA-C水浴恒温震荡器(江苏金坛市金城国胜实验仪器厂);KQ-5200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公

6、司);N-EVAP112氮吹仪(美国Organomation公司);匀浆仪(美国Omni公司);pHS-25酸度计(上海雷磁仪器厂)。磺胺嘧啶(Sulfadiazine，SDZ)、磺胺二甲基嘧啶(Sulfamethazine，SM2)和磺胺甲唑(Sulfamethox-azole，SMZ)的纯度≥99%(Sigma公司)。荧光胺(Fluorescamine，AlfaAesar公司)，甲醇、乙腈和丙酮均为HPLC级(TEDIA公司)。乙酸为优级纯，其它试剂均为分析纯。实验用水为超纯水。2009-07-12收稿;2009-11-20接受本文系

7、安徽省科技厅重点实验室项目资助*E-mail:yuhx@nju.edu.cn430分析化学第38卷2.2样品制备干(鲜)样制备:将蔬菜样品置于烘箱中(<50℃)烘24h，磨碎后备测(匀浆成糊状后备测)。准确称取5.00g匀浆后的鲜样(干样0.50g)于50mL离心管中，加入25mL甲醇，15g无水Na2SO4(干样不加)，拧紧盖子，置于振荡器上提取30min，4000r/min离心5min，将上清液过滤到浓缩瓶中(滤纸先用少量甲醇淋洗)。离心管中剩下的残渣再用甲醇重复提取2次，合并甲醇提取液。将提取液旋转蒸发浓缩至近干(45℃)，再用N2吹

8、干。2.3实验方法将3种SAs贮备液分别用0.1mol/LHCl配制成不同浓度的标准溶液。准确吸取0.5mL滤液于2mL样品瓶中，加0.6mol/L乙酸钠缓冲溶液(用1mol/L