高效液相色谱荧光检测器法测定乳和乳粉中尿素含量

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1、232014,Vol.37No.1乳业科学与技术※分析检测摘要：建立了高效液相色谱荧光检测器法测定乳及乳粉中尿素的方法。样品经乙醇水溶液提取后，在酸性条件下与羟基呫吨衍生反应，以乙腈和乙酸钠溶液做流动相，反相色谱柱分离，荧光检测器λnm和λnm测定，外标法定量。结果表明：在～μg/mL范围内线性良好，R＞，配方奶粉和液态奶中加标回收率分别为～和～，分别为～和～。在乳粉和液态奶中方法检出限分别为mg/kg和mg/kg。该方法简便、快速，灵敏度高，结果准确可靠，检验数据重现性好。关键词：尿素；乳；乳粉；高效液相色谱荧光检测法；羟基呫吨()Abstra

2、ct:Amethodfordeterminingureainmilkandmilkpowderwasdevelopedusinghighperformanceliquidchromatographywithfluorescencedetection(HPLC-FLD).Sampleswereextractedwithamixtureofwaterandethanol,thesupernatantwasderivatizedwithasolutionofxanthydrolinacidiccondition.Thechromatographicsep

3、arationwasperformedonareversed-phaseC18columnusingamobilephaseconsistingofacetonitrileandsodiumacetatesolution.Thederivatizedproductswereseparatedandtestedusingafluorescencedetectoratλex213nmandλem308nm.Themethod2showedagoodlinearrelationshipintherangeof0.1–10.0μg/mL,withR>0.9

4、99.Thespikedrecoveriesofureainformulamilkpowderandliquidmilksampleswereintherangeof104%–106%and83.4%–101%withRSD2.1%–5.7%and3.2%–4.9%,respectively.Thelimitsofdetection(LODs)informulamilkpowderandliquidmilkwere30and12mg/kg,respectively.Thismethodprovedrapid,sensitive,reliablea

5、ndreproducible.Keywords:urea;milk;milkpowder;highperformanceliquidchromatography-fluorescencedetection;xanthydrol中图分类号：文献标志码：尿素是在肝脏和肾脏中由蛋白质代谢产物形成的小法，如―《乳与乳制品中非蛋白氮含量分子有机物。尿素在哺乳动物体内以较高的浓度存在，的测定》、―《出口乳与乳制品中非蛋白如在尿液，血液和乳等体液和组织中。尿素是乳的常氮含量的测定》。对于尿素含量检测，文献和标准中多规组分，是构成乳中非蛋白氮的重要部分。牛乳中尿素

6、以分光光度法为主，即利用尿素和显色剂（如二乙酰一正常含量范围在～，有资料认为牛乳中肟、丁二酮肟、二甲氨基苯甲醛、格里斯试剂）生成带尿素含量在以下都是正常的。研究认为乳颜色的络合物比色测定，其他还有近红外光谱法、中尿素水平与蛋白质、能量、饮水量摄入和尿排量都有测定值差异测定的酶法、流动注射分析方法等。关系。高效液相色谱法测定尿素含量已经应用在多个领年发生了原料奶收购中非法添加非蛋白氮（如域，如高效液相色谱紫外分光法（三聚氰胺、尿素等）事件后，国家发布了多个非蛋白氮，检测方法。但是，三聚氰胺检测方法以及非蛋白氮总量）直接测定化妆品、土壤、黄酒中的尿素

7、，的检测方法多采用沉淀蛋白、滤液消化蒸馏后酸滴定高效液相色谱荧光检测器法（※分析检测JournalofDairyScienceandTechnology2014,Vol.37No.124，）乳和乳粉预处理测定血液、红酒、黄酒中尿素。由于尿素是强极性物前处理：准确称取试样于离心管中，加质，用时，对色谱柱要求较高，且尿素最大紫入水溶解完全，用无水乙醇定容至，涡旋混外吸收波长低（nm），干扰因素也很多。因此少有匀，室温下超声，离心，取上清法检测乳和乳粉中尿素的报道。液μL，加入μL浓度为羟基呫吨溶液利用羟基呫吨测定尿素的含量是一种传统方法，和μL浓度为

8、盐酸溶液混匀，避光衍生，用如利用醋酸介质中的生成黄色二黄质基脲的重量法测定μm有机滤膜过滤，待定。固体肥料中尿素。和邢江涛等利用尿素与色