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1、高效液相色谱衍生化法测定脑脉康中冰片含量【关键词】冰片 【Abstract】 AIM:TodevelopaneethodfordeterminingtheborneolcontentintraditionalChinesemedicine.METHODS:Byprecolumnderivatizationately20timesthemoleratioofborneol）catalyzedby4dimethylaminopyridine（DMAP,approximately40timesthemoleratioofborneol
2、）inacetonitrileatroomtemperature，thereactionmixturesnethanol∶obilephase,anddetectedat225nm.RESULTS:Thecalibrationcurveolforborneol.TheborneolcontentsoftethodissimpleandaccurateforthedeterminationofborneolcontentintraditionalChinesemedicine. 【Key，高效液相色谱测定脑脉康中冰片含量.结果：冰
3、片在1～10nmol范围内，色谱峰面积与进样量呈线性关系（R2=0.9996,P<0.01).两批脑脉康中冰片的含量分别为7.9%和7.1%,RSD分别为1.0%和1.5%(n=5).平均回收率为99.9%，RSD为1.8%(n=4).结论：高效液相色谱衍生化法用于测定脑脉康中的冰片含量方法简便、准确、可行. 【关键词】冰片；高效液相色谱法；衍生化;3,5二硝基苯甲酸冰片酯 0引言 冰片具有通诸窍，散郁火，消肿止痛之功能，常用于内服及外用中成药中.有关冰片的含量测定方法，由于冰片化学结构无特征紫外吸收，因此主要采用薄层
4、扫描法和气相色谱法［1］.高效液相色谱仪是实验室常见分析仪器，适用于常见中成药成分的分离和测定［2-4］，但紫外吸收弱的化合物直接检测较为困难.根据冰片结构中含羟基的特点，3，5二硝基苯甲酰氯可作为此类化合物的衍生化试剂［5］，在叔胺或吡啶类化合物的催化下可和冰片反应生成具强紫外吸收的3，5二硝基苯甲酸冰片酯.我们利用此原理以反相HPLC法对脑脉康中冰片含量进行了测定方法学研究. 1材料和方法 1.1材料高效液相色谱仪配备紫外检测器（日本岛津LC10Avp），色谱柱：KromasilC18150.0mm×4.6mm,5μm(大
5、连伯瑞公司填充).冰片对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号7438902），溶于乙腈中制成浓度为1mmol・L-1的溶液；3，5二硝基苯甲酰氯（DNBCl，北京化工厂），溶于乙腈中制成浓度为5mmol・L-1的溶液；4二甲氨基吡啶（DMAP,Sigma公司），溶于乙腈中制成浓度为40mmol・L-1的溶液.3,5二硝基苯甲酸冰片酯（自制，mp:148～150℃），乙腈（色谱纯），甲醇（分析纯）.脑脉康肠溶胶囊（自制，批号20010319,20010426）. 1.2方法 1.2.1
6、色谱条件以甲醇：水（88：12）为流动相，流速1.0mL・min-1,检测波长225nm，进样体积5μL的色谱图（Fig1）. 1.2.2衍生反应温度和时间考察经试验发现反应温度(20～80℃)对衍生反应无明显影响.在室温下，混合2min后衍生反应即可完成. 1.2.3DNBCl用量选择将冰片和DMAP用量固定,改变衍生化试剂DNBCl的用量（Fig2）. 实验表明当DNBCl与冰片的摩尔比(nDNBCl/nborneol)为35倍时，衍生物相对色谱峰面积最大，但放置稳定性稍差，而摩尔比为20倍时放置稳定性较好
7、，因此正式实验选择DNBCl与冰片的摩尔比为20倍. 图13,5二硝基苯甲酸冰片酯(A)、缺冰片之脑脉康(B)、冰片对照品（C）、脑脉康（D）衍生反应后色谱图（略） Fig1HPLCchromatogramsofborneyl3,5dinitrobenzoate(A),derivatizedNaoMaiKangexcludingborneol(B),derivatizedstandardborneol（C）,derivatizedNaoMaiKangsample（D）（略） 图2DNBCl用量对衍生反应的影响（略） Fig
8、2EffectonderivatizationoftheDNBCl/borneolmoleratio（略） 1.2.4DMAP用量选择将冰片和DNBCl用量固定,改变催化剂DMAP的用量（Fig3）.实验表明当DMAP与冰片的摩尔比(nDMAP/
