探析高效液相色谱法测定发酵液中康百汀含量

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1、华南理工大学硕士学位论文高效液相色谱法测定发酵液中康百汀含量姓名：吴燕强申请学位级别：硕士专业：化学工程指导教师：韦朝海;罗定军20050501摘要摘要普伐他汀(Pravastatin)是一种新型降血脂药，属国家二类新药，其发酵生产是通过稀有马杜拉放线菌(Actinomadura)将康百汀(Compactin)生物转化而成。康百汀发酵液中康百汀以康百汀酸和康百汀内酯两种形式存在，准确快速的检测分析方法直接影响到普伐他汀的质量及生产成本。缩短发酵液中康百汀含量测定时间，减少环境污染是本论文的目的所在。论文根据康百汀发酵生产特性，摸索出康百汀发酵液提取溶剂及提取时

2、间等条件特征，设计并采用高效液相色谱法对康百汀发酵液进行分析测定试验，初步建立一种快速测定发酵液中康百汀含量的方法，实现了实验室研究与发酵工程技术的有机结合。论文研究结果表明，当采用高效液相色谱法HysperilODS2色谱柱(250ram×4．6mm，5urn)，流动相为乙腈：0．03mol·L。1磷酸二氢钠缓冲液(1200：800，v／v,pH=4．0)，流速为1．0m!·rain-1,检测波长为238nm，柱温25℃，进样量10lJl时，康百汀发酵液生产中康百汀酸和康百汀内酯分别在9．75～487．68mg·L～，10．20～509．79mg·L。1内呈

3、良好线性关系，相关系数(r)分别为0．999942和0．999801，平均加样回收率分别为99．6％和99-3％，RSD分别为0．42％和O．29％。连续6个月的试验测定结果表明，本研究课题所得出的方法简单，准确可靠，重现性好，可用于发酵液中康百汀含量的测定。关键词：普伐他汀；康百汀；康百汀酸：康百汀内酯；高效液相色谱法兰堕堡三盔兰竺±兰堡堡苎ABSTRACTProvastatinisakindofnewcholesterol—loweringmedicine．Itbelongstotwonewmedicineinnation．Compactinwillbec

4、onvertedintopravastatinbyActinomadurainfermentation．Compactinexsitswithcompactinacidandcompactinlactoneinthefermentation．Thequalityandcostofpravastatinwillbeaffectedbytheaccurateandrapiddeterminationmethod．TheobjectiShowtoshogenthetimeofdeterminationandreducepollutant．Accordingtothe

5、productioncharacterofcompactininfermentation，theextractivesolventandtimeofcompactinfermentationwereexplored．ThedeterminationofcompactininfermentationbyHPLCwasalsodesignedandused．Andnowakindofrapiddeterminationmethodofcompactininfermentationwasestablished．Thelaboratoryresearchandferm

6、entationengineeringwascombinedtoallorganism．TheresearchindicatethattheHPLCmethodcouldbeusedtodeterminecompactinacidandcompactinlactoneatthesametime．ThechromatographicconditionsincludedHyspersilODS2column(4．6mm×250mm，5urn)，Acetonitrile一0．03mol’L—NaH2P04buffer(1200：800，v／v,pH4．0)asthe

7、mobilephase，flowratewas1．0ml·min-1Thedetectionwavelengthwas238nm．Thecolumntemperaturewas25℃．Theinjectionvolumewas10儿】．Theresultsjndicatethatthestandardcurveofcompactinacidwaslinearovertheconcentrationrangeof9．75～487．68mg’L-l,thecorrelationcoefficientwas0．999942．theaveragerecoverywas

8、99．6％withRSD0．42％．t